Participación de ROS en la muerte celular inducida por terapia fotodinámica con ALA en células de adenocarcinoma de pulmón

TEIJO JM,; DIEZ B,; BATLLE A,; FUKUDA H

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LIX REUNION ANUAL DE LA SAIC; 2009

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La terapia fotodinámica del cáncer (TFD) consiste en la incorporación selectiva de un fotosensibilizante (FS) en las células tumorales y la posterior irradiación lumínica. Las porfirinas son los únicos FS sintetizados endógenamente mediante la incubación con ácido aminolevulínico (ALA). A fin de evidenciar la participación de las especies reactivas de oxígeno (ROS) en la inducción temprana de la muerte celular, se determinó el grado de protección (GP) de distintos secuestrantes (GSH, Manitol, Triptofano y Ascorbato) en la TFD de células A549 (GP:relación supervivencia post-TFD en presencia del secuestrante y supervivencia post- TFD en ausencia del secuestrante). Se analizó también el efecto de los secuestrantes con naranja de acridina/bromuro de etidio y Annexina/Ioduro de propidio. Las células se preincubaron 1h con distintas concentraciones de secuestrantes a fin de determinar citotoxicidad y fotoactividad per se. Luego, se incubaron 3hs con ALA 1mM, y se irradiaron a distintos tiempos para determinar supervivencia post-TFD y GP. A las 2hs se realizó el ensayo de MTT. Los estudios de apoptosis se realizaron con la concentración de secuestrante no tóxica que presentó mayor GP (GSH: 1mM, GP: 2,1±0,3; Manitol: 10mM, GP: 1,1±0,1; Triptofano: 1mM, GP: 1,7±0,1; Ascorbato: 1mM, GP: 2,6±0,1). A esas concentraciones se observó un aumento en la viabilidad post-TFD con la tinción: El ascorbato mostró el mayor GP (%Apoptosis post-TFD 7 min: 16,3±1,3% vs. 65,8±23,7%; %Apoptosis post-TFD 10 min: 48,3±2,7% vs. 98,4±3,5%; con y sin ascorbato respectivamente) Con el resto de los compuestos se observó efectividad a los 10 min de iluminación pero no a los 7 min. (% Apoptosis post-TFD 10 min con secuestrantes: Triptofano: 74,6±2,6%; Manitol: 64,3±1,6%; GSH: 74,9±3,1%). Estos datos se corroboraron por citometría de flujo. Los resultados revelan la participación de las ROS en la muerte celular post-TFD y proveen una herramienta para minimizar el fotodaño en los tejidos no tumorales.