Rol del pigmento estafiloxantina en la fotoinactivación de Staphylococcus aureus

DIAZ, R; CALVO, G; CASAS A; LOMBARTE SERRAT A; SULIGOY M; BUZZOLA, FR; SAENZ, D; SORDELLI DO

Capital Federal

Congreso; 17º Congreso Internacional de Medicina Interna del Hospital de Clínicas de Buenos Aires; 2018

Hospital de Cl¨ªnias "Jos¨¦ de San Mart¨ªn", UBA

Objetivos: Estudiar la respuesta de S. aureus mediada por la STX frente a la inactivaci¨®n fotodin¨¢mica en presencia o ausencia del fotosensibilizante azul de toluidina (AT). Materiales y M¨¦todos: Se utilizaron las cepas isog¨¦nicas SH1000 y RN6390 y los aislamientos cl¨ªnicos Sa14 y Sa14P de S. aureus. Las extracciones del pigmento a partir de suspensiones bacterianas con igual densidad ¨®ptica se realizaron con metanol y se cuantificaron espectrofotom¨¦tricamente a 450 nm (DO450). Para la fotoinactivaci¨®n bacteriana se irradiaron las bacterias con luz blanca no coherente durante 60 min luego de la incubaci¨®n en oscuridad con 50 ¦ÌM de AT. La eficiencia del tratamiento se determin¨® mediante el recuento de las UFC/ml. En ausencia de bacterias, se cuantific¨® fluorom¨¦tricamente la generaci¨®n de ox¨ªgeno singlete producido al iluminar la soluci¨®n con AT en presencia o ausencia del extracto de STX. Resultados: En las suspensiones de S. aureus con igual DO600 se cuantificaron espectrofotom¨¦tricamente los niveles de STX: SH1000 (0.468¡À0.045), RN6390 (0.164¡À0.096), Sa14 (0.205 ¡À0.033) y Sa14P (0.450¡À0.123). La producci¨®n del pigmento por SH1000 y RN6390 se mantuvo en cantidades similares a las iniciales hasta el d¨ªa 14. Los espectros de absorci¨®n de la STX extra¨ªda fueron similares entre las cepas SH1000 y Sa14P y entre Sa14 y RN6390. Por otro lado, la irradiaci¨®n durante 60 min del pigmento extra¨ªdo de la cepa SH1000 redujo a un 22% la cantidad del mismo (DO450: 0.427¡À0.028 a 0.094¡À0.018). Se comprob¨® que la STX act¨²a como secuestrante espec¨ªfico de ox¨ªgeno singlete, ya que inhibi¨® a la mitad (disminuci¨®n de 605 a 315 unidades de fluorescencia) la generaci¨®n fotodin¨¢mica de esta especie reactiva. Para SH1000, RN6390 y Sa14, la fotoinactivaci¨®n mediada por AT redujo en 4, 5 y 6 ¨®rdenes de magnitud, respectivamente, el n¨²mero de bacterias comparado con aquellas no irradiadas. Para Sa14P, el mismo tratamiento redujo 6 ¨®rdenes de magnitud la cantidad de bacterias viables. Conclusiones: La STX estar¨ªa actuando en ausencia de bacterias como secuestrante de radicales libres (ox¨ªgeno singlete), sin embargo no se observa una protecci¨®n significativa de la acci¨®n fotoinactivadora entre las cepas con mayor producci¨®n de este pigmento. Debido a posibles diferencias en las defensas antioxidantes entre cepas, y el comportamiento de los agentes secuestrantes frente a la acci¨®n de las diferentes dosis lum¨ªnicas son necesarios estudios complementarios para elucidar el rol de la STX en la fotoinactivaci¨®n de S. aureus.