Modificación de la respuesta a la Terapia Fotodinámica inducida por ácido 5-aminolevúlico (ALA-TFD) por sulfuro de hidrógeno (H2S)

CALVO G, DI VENOSA G, VALLECORSA P, CERVINI G, ORLANDO C, CASAS A, SAENZ D.

Buenos Aires

Jornada; XXXII Jornadas de Oncología Inmunooncología: Avances diagnósticos y terapéuticos; 2017

Objetivos: El objetivo de este trabajo es estudiar el efecto del H2S en el tratamiento con ALA-TFD.La terapia fotodinámica (TFD) es un tratamiento contra el cáncer, que combina un fotosensibilizador (FS) y la luz. Cuando la luz llega al PS, este se excita, y desencadena la generación de especies de oxígeno reactivo (ROS), matando a las células. Nuestro grupo se ha centrado en el estudio del Pro-FS, el ácido 5-aminolevulínico (ALA), que conduce a la síntesis del FS Protoporfirina IX (PpIX). La PpIX se acumula preferentemente en las células cancerosas, y es la que ejerce el efecto citotóxico. El sulfuro de hidrógeno (H2S) es una molécula que pertenece a la familia de los transmisores gaseosos, junto con el óxido nítrico y el monóxido de carbono. El H2S es producido endógenamente y está involucrado en una variedad de procesos fisiológicos y patológicos.Materiales y Métodos: La línea celular LM2 (tumor mamario murino, Instituto Roffo, Argentina) se trató con ALA-TFD y se adicionó H2S en diferentes tiempos del tratamiento (24 h antes de la irradiación, co-incubado con ALA 1 mM, durante la irradiación, post-TFD, y la combinación de las tres condiciones).Los niveles de PpIX sintetizados se determino por espectrofluorometría. Los niveles de GSH y las actividades enzimáticas se determinaron por espectrofotometría.Resultados: La línea celular LM2 (tumor mamario murino, Instituto Roffo, Argentina) se trató con ALA-TFD y se adicionó H2S en diferentes tiempos del tratamiento (24 h antes de la irradiación, co-incubado con ALA 1 mM, durante la irradiación, post-TFD, y la combinación de las tres condiciones).Sin H2S, la dosis de luz letal 50 (LD50) fue 114 mJ/cm2; con H2S durante la irradiación, DL50 fue de 116 mJ/cm2; con H2S post TFD, LD50 fue de 152 mJ/cm2; con H2S coincubado con ALA, DL50 fue de 304 mJ/cm2 y con H2S en cada punto de TFD, la DL50 no se logró ni siquiera con la dosis más alta utilizada.Estos resultados muestran que el H2S indujo una disminución de la sensibilidad de las células a la TFD. La PpIX se extrajo de las células después de la incubación con ALA o ALA + H2S, y después se determino espectrofluorométricamente. En todas las líneas celulares, la síntesis de PpIX fue inhibida por H2S 10 mM en un 53%.Se determinaron los niveles de glutatión reducido (GSH), en células LM2 después de la exposición a H2S 10 mM (24 y 2 h antes de la determinación) y se observó un ligero pero significativo aumento en los niveles de GSH en células que han estado expuestas a H2S (control: 73 y tratamiento: 84 nmoles/106 células).También se determinó el efecto directo del H2S como scavenger de ROS y se encontró que los niveles de ROS disminuyeron cuando la concentración de H2S se incrementó.Se determinó la actividad de 2 enzimas implicadas en la biosíntesis de PpIX, ALA-deshidrasa (ALA-D) y porfobilinógeno deaminasa (PBG-D), en eritrocitos de sangre fresca, después de la incubación con diferentes concentraciones de H2S. La actividad de ALA-D disminuyó 38% con la concentración de H2S más baja utilizada (10 uM) y la de PBG-D disminuyó 10% a partir de 100 uM de H2S.Conclusiones: Nuestros resultados sugieren que el H2S produce un efecto protector sobre el tratamiento TFD y puede deberse a múltiples factores: el aumento del estado antioxidante celular, la eliminación directa de ROS y la disminución de la síntesis de PpIX. Estos resultados deben tenerse en cuenta ya que varios tejidos producen altos niveles de H2S y podrían tener una respuesta diferencial a la TFD y, además, estos hallazgos ayudarían a mejorar la eficiencia de la