Tratamiento Fotodinámico de nuevos derivados meso-sustituidos de porfirinas en células tumorales

MAMONE L; ORLANDO C; DI VENOSA G; CALVO G; CASAS A; VALLECORSA P; SAENZ D; DURANTINI E

CABA

Congreso; 16° Congreso Internacional de Medicina Interna del Hospital de Clínicas de la Universidad de Buenos Aires; 2016

Hospital de Clínicas de la Universidad de Buenos Aires

La Terapia Fotodinámica (TFD) involucra la administración de un fotosensibilizante (F) y la subsiguiente irradiación con luz visible, la cual promueve especies altamente reactivas del oxígeno, que reaccionan con una variedad de biomoléculas derivando en la muerte celular. En el presente trabajo, cuatro nuevos derivados de porfirinas meso-sustituidas fueron testeados como potenciales Fs en la línea tumoral LM3 de adenocarcinoma mamario murino. Se usaron la 5,10,15,20-tetrakis[4-(3-N,N-dimetilaminopropoxi) fenil] porfirina (TAPP), la 5,15-di(4-[3-N,N-dimetilaminopropoxi] fenil)-10,20-di(4-trifluoromethil feenil) porfirina (A2B2), la 5,10,15,20-tetrakis[3-(N-etil-N-metilcarbazoil)] clorina (TEMCC) y su porfirina análoga (TEMCP). Los Ps mostraron la típica banda de Soret a 420 nm y las cuatro bandas Q entre 515 y 650 nm. Una menos intensa banda a 650 nm se obtuvo para TEMCC comparado con TEMCP. Estos compuestos también producen oxígeno singulete con campos cuánticos de 0.40-0.53 en Dimetilsulfóxido. La toxicidad celular oscura luego de ser expuestas a los compuestos durante 3 horas determinó la concentración máxima de trabajo, estas fueron de 2.5 M para TAPP y A2B2; y de 5 M para TEMCC y TEMCP. Para testear su eficacia como Fs, las celulas LM3 fueron expuestas a cada compuesto, empleando las concentraciones de trabajo mencionadas, durante 3 horas y luego irradiadas con un banco de tubos fluorescentes (tasa de fluencia de 0.5 mW/cm2). La dosis letal 50 (DL50) obtenida para cada porfirina a 5uM fue la siguiente: TAPP: 135 mJ/cm2, TEMCC: 360 mJ/cm2, TEMCP: 420 mJ/cm2, A2B2: 600 mJ/cm2, mostrando que TAPP es el derivado más fotoactivo. Por ello, se escogió esta porfirina para realizar la caracterización de los mecanismos de fototoxicidad. Estudios de uptake sugieren que TAPP es principalmente transportado por difusión pasiva. Estudios de colocalización fueron realizados utilizando sondas fluorescentes específicas de organelas (LysoTracker Green para lisosomas, Mito Tracker Green para mitocondria y NBD C6-Ceramide para Aparato de Golgi). Mediante microscopía de epifluorescecia y confocal hemos podido determinar que TAPP se localiza principalmente en las proximidades de las mitocondrias.