Glicosilación no enzimática de la PBGS:in vivo e in vitro

VARELA, LAURA; OLIVERI, LEDA; ROSSI JUAN PABLO; BATLLE, ALCIRA; GEREZ, ESTHER

Mar del Plata

Congreso; Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2008

La diabetes mellitus es un síndrome caracterizado por la hiperglicemia la cual se asocia a las complicaciones de esta enfermedad. La actividad de porfobilinógeno sintetasa (PBGS) está disminuída en sangre de pacientes diabéticos respecto a los controles normales. Los mecanismos que llevan a la inactivación de la PBGS aún se desconocen. Estos podrían involucrar cambios en la expresión génica y/o alteraciones postraduccionales como la glicación no enzimática de la lisina del sitio activo de la enzima, o la oxidación de los residuos cisteína esenciales para su actividad. Para estudiar la naturaleza de los cambios observados en la actividad de la PBGS se desarrolló un modelo murino de diabetes. Ratones machos adultos de la cepa CF1 fueron diabetizados con una única dosis de estreptozotocina (STZ) (170 mg/kg, ip) y  divididos en dos grupos. El grupo STZ no recibió tratamiento adicional. El grupo STZ+I (I: insulina, 30 U/100 g, sc) recibió insulina durante 9 días antes del sacrificio. En el grupo STZ la actividad de la PBGS hepática estaba disminuido un 60% (VC:12,33±1,06 U/mg; VSTZ:5,01±1,55 U/mg, p<0,05). Sin embargo, la expresión del ARNm y los niveles de proteína de la PBGS no se encontraron modificados. El tratamiento con insulina (grupo STZ+I) normalizó la glucemia al mismo tiempo que restauró la actividad de la enzima a los valores del grupo control (VC:12,33±1,06 U/mg, VSTZ+I:10,72±1,37 U/mg, p<0,05). En una segunda etapa se evaluó la hipótesis de la pérdida de actividad por glicación no enzimática. Para ello, se realizaron ensayos in vitro con la enzima pura recombinante humana (PBGSh) la cual se incubó a diferentes tiempos con glucosa/BH4Na (20 mM) y manitol/ BH4Na (20 mM). Se observó una disminución de mas del 50% en la actividad del PBGSh a partir de la hora de incubación en presencia de glucosa (VC:620,67±30,89 U/mg; VG: 269±26,87 U/mg, p<0,05). Estos resultados apoyan la hipótesis de que la pérdida de actividad del PBGS sería debido a la glicación no enzimática.