Derivados dipeptídicos de ALA para su uso en Terapia Fotodinámica

VALLECORSA, PABLO; DI VENOSA, GABRIELA; MAMONE, LEANDRO; SAENZ, DANIEL; GIUNTINI, F; BATLLE, ALCIRA; MACROBERT, ALEXANDER; EGGLESTON, L; CASAS, ADRIANA

Córdoba

Congreso; Segunda Reunión de Fotobiólogos Moleculares Argentinos; 2013

GRUPO ARGENTINO DE FOTOBIOLOGÍA

La Terapia Fotodinámica (TFD) es una técnica no térmica utilizada para inducir daño tisular con luz luego de la administración de una droga fotosensibilizante activada por luz, la cual puede ser retenida selectivamente en lesiones malignas en relación al tejido sano adyacente. En los últimos años, la TFD mediada por el ácido 5-aminolevulínico (ALA) se ha vuelto uno de los campos más prometedores en la investigación en TFD. El ALA es la prodroga del fotosensibilizante Protoporfirina IX (PpIX). La eficacia in vivo de la TFD-ALA ciertas veces está limitada por la naturaleza hidrofílica de la molécula, promoviendo una pobre penetración a través de ciertos tejidos malignos. Una solución atractiva es la de mejorar las propiedades físico-químicas y de liberación selectiva de las moléculas de ALA en líneas celulares específicas mediante la incorporación de derivados peptídicos cortos a la molécula de ALA. El objetivo de este trabajo fue el de testear dos nuevos derivados dipeptídicos de ALA, AcLeuALAMe (Leu-ALA) y AcPheALAMe (Phe-ALA) en diferentes líneas celulares, para su uso en TFD. Las líneas celulares empleadas fueron las F3II y LM3 de carcinoma mamario con diferentes fenotipos de invasión. También se emplearon las PAM212 de queratinocitos normales y las B16 de melanoma. La PpIX sintetizada a partir de los derivados de ALA se evaluó fluorométricamente previa extracción química con HCl 5% y luego se expresó como Unidades de Fluorescencia (UF). La síntesis de PpIX a partir de ALA fue la siguiente, en orden decreciente: PAM212>LM3>F3II>B16. Para obtener valores plateau de PpIX se emplearon concentraciones de ALA de entre 0,4 y 0,6 mM en todas las líneas: PAM212: 30 UF/105 cél., LM3: 15  UF/105 cél., F3II: 10 UF/105 cel. y B16: 5 UF/105 cél. Por otro lado, empleando concentraciones de  0,001mM y 0,05 mM de Phe-ALA y Leu-ALA respectivamente, en las cuatro líneas, se alcanzaron valores similares a los máximos alcanzados con ALA. Los resultados demuestran que para inducir iguales concentraciones de PpIX a las inducidas por ALA tanto en las líneas tumorales como en las no tumorales, son necesarias concentraciones de aproximadamente dos órdenes de magnitud menores. La aplicación del tratamiento fotodinámico empleando 0,05 mM de derivados no siempre resultó en una Dosis Lumínica Letal 50 (LD50) proporcional a la síntesis de Porfirinas: PAM212: 34,2 mJ/cm2 (Phe-ALA y Leu-ALA), F3II: 24,7  mJ/cm2 (Phe-ALA y Leu-ALA), LM3: 20 mJ/cm2 (Phe-ALA y Leu-ALA), B16: 13,3 y 17,1 mJ/cm2 para Phe-ALA y Leu-ALA respectivamente. Empleando dosis equimolares, el ALA no indujo ningún daño asociado a la terapia, para todas las líneas testeadas. Vale la pena notar que PAM212, el cual produce la mayor síntesis de PpIX, es el que más resistió a la terapia mediada por dipéptidos de ALA, mostrando que el tipo celular o la línea es un punto clave para determinar la resistencia al fotodaño. Estudios de mecanismos de entrada a la célula sugieren que los dipéptidos de ALA son en parte tomados a partir de transporte pasivo. Explantes de piel de ratón expuestos a 0,1 mM y 1 mM de ALA y dipéptidos, indujeron cantidades equivalentes de Porfirinas sintetizadas (alrededor de 15 µg porfirinas/g tejido), demostrando así que la penetración in vivo de los derivados a través de la piel es diferente al efecto in vitro.