INACTIVACIÓN FOTODINÁMICA DE TRYPANOSOMA CRUZI POR EL TRATAMIENTO CON UNA AMINOPORFIRINA

MARTINEZ M DEL C.; RANDAZZO L,; MORA SJ; ALVAREZ MG; MILANESIO ME; DURANTINI E; FUKUDA H,; BATLLE A,; LOMBARDO E.

Cordoba

Congreso; XI ELAFOT; 2012

Grupo de Fotoquimica, UNRC

Resumen: Los fotosensibilizadores derivados de porfirinas ejercen un importante efecto citotóxico mediado por la  generación de especies reactivas de oxígeno, las cuales se generan por la irradiación con luz visible. En general, el oxígeno molecular singlete, O2(1Dg), es una de las principales especies reactivas que producen la pérdida de funcionalidad celular. Sabiendo que concentraciones altas de hemina ejercen un efecto inhibitorio sobre el crecimiento de Trypanosoma cruzi, en este trabajo evaluamos el efecto in vitro de una porfirina sintética, 5,10,15,20-tetrakis[4-(3-N,N-dimetilaminopropoxi)fenil]porfirina (A4) sobre el parásito en los estadios epi- y tripomastigote. La porfirina A4 fue seleccionada debido a que contiene cuatro grupos aminos separados del macrociclo tetrapirrólico por una cadena alifática, la cual le confiere mayor movilidad para interaccionar con la membrana celular. Los espectros de absorción UV-visible y de emisión de fluorescencia en N,N-dimetilformamida muestran las bandas típicas de las porfirinas base libre en estado monomérico. En este medio, el rendimiento cuántico de producción de O2(1Dg) es de 0,74. Los estudios in vitro mostraron  para epimastigotes un valor de IC50 de 10,04 ± 0,50 µM, similar al del benznidazol tomado como droga de referencia (7,40 ± 0,45 µM). Sobre tripomastigotes el efecto de la porfirina se evaluó con y sin una irradiación de 15 minutos luego del agregado de la droga. Los parásitos no irradiados mostraron un IC50 de 11,64± 0,48 µM  mientras que luego de la irradiación, este valor resultó ser menor de 11,6 nM. Establecida la efectividad de A4 como potente agente tripanomicida, pensamos en su utilización en los bancos de sangre para tratar la sangre contaminada, minimizando así la propagación de la enfermedad de Chagas por transfusiones. Luego de establecer un método sensible y eficiente para la cuantificación de A4 por espectrofotometría de fluorescencia, investigamos la estabilidad de esta porfirina en distintos medios, pH’s y los tiempos de exposición a la luz. Observamos que luego del tratamiento de la sangre entera con A4 e irradiación, los glóbulos rojos no se dañan y ni la porfirina ni ningún tipo de metabolito fluorescente derivado de ella, fueron detectados en el plasma ys glóbulos rojos. Descartada la interacción de A4 con la albúmina, que podría enmascarar su fluorescencia, postulamos que la porfirina  posiblemente sea fagocitada por macrófagos después de ejercer su acción tripanocida. La citotoxicidad de A4 fue ensayada sobre células Vero (células epiteliales de riñón de mono) y arrojó para la  concentración 50% citotóxica (CC50) valores de 267,4 µM y 22,1 µM para células tratadas en oscuridad o irradiadas durante 15 minutos, respectivamente. Este estudio nos permitiría postular a la  porfirina A4 como un interesante candidato, con acción  antiparasitaria, para tratar la sangre contaminada con Trypanosoma cruzi.