Estudio comparativo de la Terapia fotodinámica con porfirinas endógenas en células de adenocarcinoma de pulmón humanas y murinas

CASSINELLI, J; TEIJO MJ,; BATLLE A,; FUKUDA H.

Mar del Plata

Congreso; LVII REUNIÓN ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC). LX REUNIÓN ANUAL Sociedad Argentina de Inmunologia (SAI).; 2012

SAIC-SAI

Resumen: Las propiedades fotodinámicas de las porfirinas se aplican en la terapia fotodinámica del cáncer (TFD. Cuando se irradia con luz, el fotosensibilizante (FS) acumulado en las células tumorales, produce reacciones fotoquímicas que llevan a la muerte celular. Las porfirinas son los únicos FS sintetizados endógenamente mediante la administración de su precursor biológico, el ácido 5-aminolevúlico (ALA). Se determinaron las condiciones óptimas para aplicar la TFD en células de adenocarcinoma de pulmón murinas (LP07, Instituto AHRoffo ) y humanas (A549). Las células se incubaron con ALA bajo diferentes condiciones experimentales, se cuantificaron las porfirinas intracelulares espectrofluorométricamente y se iluminaron con un banco de dos tubos fluorescentes. Se determinó la citotoxicidad del ALA en oscuridad y la viabilidad post TFD mediante el ensayo de MTT. La incubación con ALA 1 mM durante 3 h no fue citotóxica, pero con 24 h se observó toxicidad a partir de 10 mM para A549 y 5 mM para LP07. Al incubar las células LP07 con distintas concentraciones de ALA (0,05 a 5mM) durante distintos tiempos (1 a 5 h), se obtuvo un plateau en la síntesis de porfirinas a 0,5 mM independientemente del tiempo de incubación (12,8 ± 0,2 ng porfirinas/105 céls). A las 3 h, ambas líneas alcanzan un plateau con ALA 0,5 mM y para todas las concentraciones ensayadas, A549 presenta mayor acumulación de porfirinas (23,7 ± 0,6 ng porfirinas/105 céls.). La cinética de acumulación de porfirinas muestra un incremento en la síntesis con el tiempo de incubación (0,5 a 6 h) para ambas líneas, y una mayor síntesis en A549 para todos los tiempos ensayados (6 h incubación, A549: 107,1 ± 1,6 ng porfirinas/105 céls, LP07: 24,1 ± 0,3 ng porfirinas/105 céls.) . Al aplicar la TFD en ambas líneas en iguales condiciones (incubación con ALA 1 mM por 3 h), se observó mayor supervivencia celular en todos los tiempos de irradiación para las células LP07. La dosis lumínica letal 50 (DL50: tiempo de irradiación en el cual se obtiene una viabilidad celular del 50% 1 h post TFD) fue A549: 7 min, LP07: 10 min. Los resultados obtenidos indican que las células murinas son menos eficientes que las humanas en la síntesis de porfirinas, lo cual puede contribuir a la mayor supervivencia post TFD observada, y representan un modelo interesante para un ulterior estudio comparativo de supervivencia post tratamiento.