Factores limitantes en la inducción de muerte celular por Terapia fotodinámica con ALA en cultivos bi y tridimensionales de células de adenocarcinoma de pulmón

TEIJO, MARÍA JULIETA; DIEZ, BERENICE; MEISS, ROBERTO; BATLLE, ALCIRA; FUKUDA, HAYDÉE

Mar del Plata

Congreso; LVI REUNIÓN ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC). Reunión Conjunta SAIC ? SAFIS ? AACYTAL; 2011

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Las propiedades fotoactivas de las porfirinas al ser irradiadas con luz de longitud de onda adecuada, y la alta selectividad de las células malignas en el metabolismo de las mismas a partir del ácido 5-aminolevúlico (ALA), conforman la base de la terapia fotodinámica (TFD) la cual genera especies reactivas de oxígeno (ROS) que inducen la muerte celular. El cultivo en esferoides multicelulares (EMCs) simula las condiciones de microtumores independientemente de la vasculatura, cuyo rol en la erradicación de tumores por TFD es controversial. El objetivo del trabajo fue establecer los factores involucrados en la mayor resistencia a la muerte celular por TFD en esferoides (DL50:10 min) de la línea A549 de adenocarcinoma de pulmón humano respecto del cultivo en monocapa (DL50 7 min). Sembrando 5x104 cél/ml sobre agar 3%-RPMI (1:1) se obtienen esferoides compactos de 100-700 μm luego de 7 días. Los EMCs se incubaron 3h con ALA 1mM y se irradiaron en un banco de 2 tubos fluorescentes. La síntesis de porfirinas no varió significativamente entre la monocapa (0,109±0,1 pg/cel) y los EMCs (0,09±0,1 pg/cel) y su distribución en los distintos planos del esferoide es uniforme, según se evidenció por microscopía confocal. Mediante cortes histológicos se analizó el grado de penetración de la luz en el interior de los EMCs observándose células apoptóticas y necróticas en las zonas internas de manera dosis lumínica dependiente (confirmado con Annexina V-FITC/ioduro de propidio) y vacuolas de secreción positivas para mucopolisacáridos indicativas de diferenciación, consistente con la naturaleza de adenocarcinoma de la línea; que se pierde luego de irradiar 10 y 20 min. La producción de oxígeno singulete, agente fundamental para el inicio del daño fotoquímico, es mucho menor en los EMCs (5,5±2,7%) que en la monocapa (83,5±1,9%), indicando que la disponibilidad de oxígeno en el interior del esferoide sería el factor que limita la efectividad de la TFD en una configuración tridimensional.