MUERTE CELULAR POR TERAPIA FOTODINÁMICA BASADA EN ALA EN CULTIVOS BI Y TRIDIMENSIONALES DE CÉLULAS DE ADENOCARCINOMA DE PULMÓN

TEIJO MJ.; DIEZ B,; BATLLE A,; FUKUDA H,

Mar del Plata

Congreso; LV Reunion Anual Sociedad Argentina de Investigacion Clinica; 2010

SAIC-SAFIS-SAFE

Título: MUERTE CELULAR POR TERAPIA FOTODINÁMICA BASADA EN ALA EN CULTIVOS BI Y TRIDIMENSIONALES DE CÉLULAS DE ADENOCARCINOMA DE PULMÓN.Autores : TEIJO, JULIETA(1); DIEZ, BERENICE(2); BATLLE, ALCIRA(3); FUKUDA, HAYDÉE(4)CENTRO DE INVESTIGACIÓN SOBRE PORFIRIAS Y PORFIRINAS , DTO QUÍMICA BIOLÓGICA FCEN UBA(1)(2); CENTRO DE INVESTIGACIÓN SOBRE PORFIRIAS Y PORFIRINAS(3); CENTRO DE INVESTIGACIÓN SOBRE PORFIRIAS Y PORFIRINAS , DTO QUÍMICA BIOLÓGICA FCEN UBA(4) Resumen : El ácido 5-aminolevúlico (ALA) induce la acumulación de porfirinas fotoactivas que al iluminarse producen especies reactivas de oxígeno llevando a la muerte celular, base de la Terapia Fotodinámica del cáncer (TFD). Los esferoides multicelulares representan un modelo in vitro 3D útil para el estudio de terapias antitumorales independientemente de la vasculatura. Se reporta la puesta a punto de las condiciones para el cultivo de esferoides en la línea A549 de adenocarcinoma de pulmón humano y la respuesta de síntesis de porfirinas y viabilidad post-TFD en las conformaciones 2D y 3D del cultivo. Las células sembradas a una densidad de 5x104 céls/ml de MEM+5% SFB, sobre agar 3%-RPMI (1:1) forman esferoides al cabo de 7 días, (promedio: 1866 ± 195 céls). Se incubó con distintas concentraciones de ALA durante diferentes tiempos: en la monocapa se llegó a un plateau en la síntesis de porfirinas con ALA 0,5mM y en esferoides con ALA 1mM. A plazos cortos (3h) se observó un aumento de la síntesis de porfirinas en función del tiempo de incubación similar para ambos tipos de cultivo, pero a tiempos largos (16h) la cinética de síntesis en la monocapa (0,41±0,01 pg porf./cél) es más rápida que en los esferoides (0,28±0,10 pg porf./cél). Las células incubadas 3h con ALA 1mM se irradiaron con un banco de 2 tubos fluorescentes por distintos tiempos. Luego de 1h se analizó la viabilidad celular (MTT) y la muerte celular (naranja de acridina-bromuro de etidio). En esferoides la dosis lumínica que produce un 50% de muerte celular (DL50) mostró un ligero corrimiento (2 min) y una mayor supervivencia (31,9±8,7%) respecto de la monocapa (9,3±0,8%) para una irradiación de 20 min. Los resultados permiten inferir que si bien la síntesis de porfirinas en los esferoides es del mismo orden que en la monocapa, la accesibilidad de la luz a las células del interior del esferoide es un factor limitante para la efectividad de la terapia en este modelo de conformación 3D propia de los tumores.