CEDIE   05498
CENTRO DE INVESTIGACIONES ENDOCRINOLOGICAS "DR. CESAR BERGADA"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
SOX9 y SF1 median la trans-activación del gen de la hormona anti-Mülleriana (AMH) en la célula de Sertoli prepuberal
Autor/es:
LASALA C; SCHTEINGART H; AROUCHE N; BEDECARRÁS P; DI CLEMENTE N; REY R
Lugar:
Mar del Plata, Prov. Buenos Aires
Reunión:
Congreso; LIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2009
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
La FSH, vía AMPc, aumenta la expresión de la AMH en células de Sertoli prepuberales. El promotor de la AMH no tiene elementos de respuesta al AMPc (CRE) clásicos; en cambio, presenta sitios para los factores SOX9, SF1, GATA4 y AP1. Como dichos factores son activados por AMPc en otras células, hipotetizamos que también podrían mediar el aumento de expresión de AMH dependiente de AMPc en células de Sertoli. Usamos una línea de células de Sertoli prepuberales de ratón inmortalizadas (SMAT1) previamente validada. Para realizar ensayos luciferasa, transfectamos células SMAT1 con una construcción “5’AMH-luc” (Promotor de AMH + luciferasa) normal o con mutaciones en los sitios SOX9, SF1, GATA4 o AP1, y las cultivamos 24 hs con o sin dbAMPc 1 mM. La trans-activación de 5’AMH-luc en respuesta al dbAMPc fue inhibida por las mutaciones de los sitios SOX9 y SF1, pero no por las mutaciones de los sitios GATA4 y AP1. En experimentos de RT-PCR cuantitativa (Real-time), la expresión de SOX9 y SF1 aumentó en respuesta al dbAMPc; dicha respuesta fue bloqueada en presencia del inhibidor de PKA (H89), pero no de los inhibidores de PI3-K (LY294002), p38-K (SB203580) o MAPK (PD98059). En inmunocitoquímica, SOX9 se encontró siempre en el núcleo de las células SMAT1, en tanto que SF1 –de localización citoplásmica y nuclear– se concentró en el núcleo luego del estímulo con dbAMPc. En conclusión, la activación de la PKA por AMPc provoca un aumento de la disponibilidad de SOX9 y SF1 en el núcleo de las células de Sertoli prepuberales como resultado de un aumento de la expresión de ambos y de la translocación nuclear de SF1. La unión de SOX9 y SF1 a sus sitios específicos en el promotor de la AMH es indispensable para el aumento de la actividad de dicho promotor en respuesta a AMPc.