CEDIE   05498
CENTRO DE INVESTIGACIONES ENDOCRINOLOGICAS "DR. CESAR BERGADA"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Procesamiento de insulina en mitocondrias Su degradación
Autor/es:
CAMBEROS MC; CAO GABRIEL; MARTUCCI LC; CRESTO JC
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; SAIC, LIV Reunión Anual, 18-21 de Noviembre,; 2009
Institución organizadora:
SAIC
Resumen:
Nosotros observamos que la enzima degradante de insulina (EDI) se encuentra en la matriz mitocondrial y posee actividad degradante de insulina.
Objetivos - Demostrar que las mitocondrias regulan y degradan la incorporación de insulina
Métodos - EDI se obtuvo de músculo de rata por sucesivos pasos cromatográficos. Mitocondrias hepáticas aisladas según Parson, fueron recuperadas e incubadas a 25ºC o 30ºC, oxígeno 100%, 125I-insulina (105 cpm) e insulina fría a tiempos y dosis variables. La reacción se detuvo con N-etilmaleimida 1 mM y los mitoplastos (M) se aislaron de la membrana externa y espacio intermembrana con digitonina. La degradación se estudió por cromatografía en Sephadex G50 Superfino con elusión en ácido acético 1 M. La insulina se detectó por su posición cromatográfica y con anticuerpos específicos.
Resultados - A 30ºC la degradación de insulina fue mucho mayor que a 25ºC. A 25ºC EDI acumula insulina en M hasta los 300 seg. A 30ºC la acumulación en M (control y EDI) fue similar pero la degradación fue mayor con EDI. En el basal a 30ºC la degradación en el buffer de incubación mitocondrial fue total (tiempo experimental "0") con un pico de tirosina. Esto es, toda la insulina fue captada y degradada en forma casi instantánea. Estudios dosis/respuesta con dosis crecientes de insulina (1 ng a 10 µg) mostraron que dosis farmacológicas de insulina saturan parcialmente el sistema de transporte y degradación. N-ethilmaleimida 0,1 mM incrementó la internalización mitocondrial (Mitocondrias, Control: NS, EDI P<0.00005; Mitoplastos, Control P<0.02, EDI P<0.002) e inhibió parcialmente la degradación de insulina.
Conclusión- 1) A 30ºC toda la insulina presente en concentraciones fisiológicas fue incorporada y degradada en forma casi instantánea. 2) La degradación regula el transporte y la acumulación de insulina en el mitoplasto.