INCORPORACIÓN DE INSULINA EN MITOCONDRIAS - Su transporte

PASSICOT GA; CAMBEROS MC; CAO GABRIEL; CRESTO JC

Buenos Aires

Congreso; SAIC, LIII Reunión Anual; 2008

Soc. Arg. de Investigación Clínica

 Nosotros demostramos que la enzima degradante de insulina (EDI) se encuentra en la matriz mitocondrial (MM), siendo además la mitocondria sensible a los cambios hormonales.  Objetivos - Determinar si EDI facilita la incorporación mitocondrial de insulina. Métodos - EDI se obtuvo de músculo de rata por sucesivos pasos cromatográficos. Mitocondrias hepáticas aisladas según Parson, fueron recuperadas e incubadas a 25ºC, oxígeno 100%, insulina: 1 ng/tubo y 125I-insulina (105 c/m). Se agregó EDI, substratos o inhibidores de acuerdo al experimento. La reacción se detuvo con 1 mM de N-etilmaleimida. La MM se aisló con digitonina y se estudió el transporte de insulina por cromatografía, electroforesis (SDS-PAGE), inmunoblot y autorradiografía. Resultados - La microscopía electrónica demuestra que las mitocondrias obtenidas no presentan alteraciones estructurales. A 25ºC la insulina degradada fue: (pg/seg/mg prot), control: 0.87; EDI: 0.88, sugiriendo que se debe a proteasas mitocondriales y no a EDI. La enzima incrementa la incorporación de insulina a MM en forma dosis/dependiente (60 seg -% de incorporación: EDI “0” µg/t =1.46%, EDI 1.8 µ/t =2.04%; P<0.02, n:4). El dinitrofenol (1 mM, desacoplante mitocondrial) y la bacitracina (1 mg/ml, competidor de la insulina) disminuyen la incorporación de EDI, 50 µM de vanadato (inhibidor de ATPasas y fosfatasas) y 5 mM de succinato + ADP (substratos de la respiración celular) no lo modifican, la apirasa (que degrada ATP) la disminuye. Los perfiles cromatográficos de los mitoplastos demostraron que EDI forma un complejo con los transportadores mitocondriales. Al ser disociado se libera la insulina transportada. Conclusiones - 1) EDI transporta la insulina a través de los transportadores específicos (TOM y TIM) que utiliza la enzima para su incorporación mitocondrial. 2) La insulina es transportada dentro de EDI. 3) El transporte mitocondrial de insulina por EDI es activo.