Caracterizacion de tumores testiculares de ratones transgenicos mediante microarreglos de prote¨ªnas a partir de material microdisecado de tejido fijado en paraformaldehido y embebido en parafina.

SILVINA QUINTANA; MARCELA VENARA; RODOLFO REY; CHRISTINA SCHOTT; KARL-FRIEDRICH BECKER; HECTOR CHEMES.

Mar del Plata

Congreso; LIII Reunión Científica Anual SAIC; 2008

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

Debido a  las modificaciones que produce en su estructura macromolecular, la fijacion con aldehidos dificulta la extraccion y estudio de expresion de proteinas. Nuestro objetivo fue extraer proteinas inmunoreactivas de tumores testiculares de ratones transg¨¦nicos fijados en paraformaldehido  y embebidos en parafina para realizar analisis por Western Blot y microarreglos de proteinas. Se comparo la expresion de proteinas asociadas al crecimiento tumoral (EGFR, Ciclina D1, Ciclina D3, AKT, p-AKT, ERK y  p-ERK) en extractos de 4 testiculos (conteniendo tejido normal y tumoral: TT) con el de microdisecciones de areas exclusivamente tumorales (TM) provenientes de 7 testiculos diferentes. Cortes histologicos de 10 ¦Ìm se desparafinaron y las areas de interes se microdisecaron y transfirieron al buffer de extraccion (Kit Qproteome FFPE Tissue). La reactividad  de las proteinas extraidas se controlo con un  Western Blot de beta-actina. Los extractos se aplicaron por triplicado a portaobjetos revestidos con nitrocelulosa, se detectaron con anticuerpos especificos y los niveles de expresion se calcularon densitome¦tricamente normalizando a las proteinas totales. La expresion de AKT, p-AKT, ERK  y  p-ERK fue mayor en TM que en TT (1,73 +- 0,61 vs. 0,95+- 0,28; 1,70 +- 0,55 vs. 0,43+- 0,12;  1,47 +- 0,52 vs. 0,69+- 0,29 y 3,72 +- 1,43 vs.  0,96 +- 0,32,  p< 0,01).Similares resultados se obtuvieron con EGFR y Ciclina D3 (TM: 1,17+- 0,37; 1,18+- 0,47;  TT: 0,36+- 0,13; 0,35 +- 0,11, p<0,01). No hubo diferencias de expresion de Ciclina D1 entre TM y TT. Estos resultados indican que es posible estudiar la de expresion de proteinas mediante Western Blot y microarreglos de proteinas a  partir de microdisecciones de material fijado en paraformaldehido y embebido en parafina. Los mayores niveles de expresion observados en areas enriquecidas en tejido tumoral (TM) confirman una activacion significativa de las vias vinculadas a la  proliferacion celular en los tejidos tumorales.