HIGH RESOLUTION MELTING (HRM) COMO MÉTODO DE SCREENING DE MUTACIONES EN LOS EXONES 10 Y 11 DEL PROTOONCOGÉN RET

LABARTHE M.M.; V. DI GERÓNIMO; DRA GABRIELA SANSO; S. QUINTANA

Mar del Plata

Congreso; XLIV Congreso Argentino de Genetica; 2015

En mas del 95 % de pacientes con neoplasiaendocrina multiple tipo 2 (MEN-2) se han identificadomutaciones activadoras del proto-oncogen RET. Ladeteccion de estas mutaciones en familias con MEN-2 permite el diagnostico y tratamiento precoz de losfamiliares del caso indice con alto riesgo de desarrollarla enfermedad. Es el objetivo de este trabajo determinarla utilidad de la tecnica de HRM como metodo descreening de mutaciones en los exones 10 y 11 delproto-oncogen RET. En los ensayos se utilizaronmuestras de pacientes estudiadas previamente porsecuenciacion. Para la deteccion de mutaciones en elexon 10 se procesaron 30 muestras de ADN las cualespresentaban las mutaciones Cys620Ser, Cys609Arg,Cys618Phe, Cys620Arg, Cys611Phe, Cys620Ser,Cys609Arg y controles (normales) wild type. Para elestudio del exon 11 se procesaron 27 muestras deADN que presentaban las mutaciones Cys634Tyr,Cys634Gly, Cys634Phe, Cys634Arg y controleswild type. Las amplificaciones por PCR en tiemporeal y el analisis por HRM se llevaron a cabo en unTermociclador Rotor Gene Q con Evagreen comointercalante fluorescente. Las tecnicas desarrolladasmostraron una concordancia total con la tecnica desecuenciacion automatica mostrando una sensibilidaddel 100 % para la deteccion de las mutaciones en losexones 10 y 11 del proto-oncogen RET ensayadosen este trabajo. En conclusion, la tecnica de HRMpresenta varias ventajas como metodo de screening dela presencia de mutaciones en los exones 10 y 11 delproto-oncogen RET debido a su alta sensibilidad yrapidez (