CEDIE   05498
CENTRO DE INVESTIGACIONES ENDOCRINOLOGICAS "DR. CESAR BERGADA"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
La enzima degradante de insulina posee una función ATPasa
Autor/es:
CAMBEROS MARÍA DEL CARMEN; PASSICOT GISEL A.; CRESTO JUAN C.
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LI REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL; 2006
Institución organizadora:
Soc. Arg. de Invest. Clínica (SAIC)
Resumen:
En un trabajo previo hemos publicado que la enzima degradante de insulina (EDI) es inhibida por ATP (Exp Biol Med 226: 334-341, 2001). Es por ello que estudiamos si la hidrólisis de ATP por EDI podía ser la forma de reversión de este mecanismo inhibitorio. EDI fue extraída de músculo de rata, la hidrólisis de ATP fue determinada por la liberación de 32P a partir de g-32P-ATP y la degradación de insulina con 125I-insulina. La función ATPasa fue investigada con varios métodos: cromatogratografía en Sephadex G200, inmunoprecipitación de EDI y electroforesis en gel de acrilamida en condiciones no disociantes (PAGE). Además se estudió EDI recombinante (rEDI) para comparar con EDI extractiva. Todos los resultados mostraron concordancia entre la degradación de insulina y la hidrólisis de ATP. rEDI y EDI extractiva mostraron similar hidrólisis de ATP sugiriendo que la enzima posee ambas funciones. Para definir esta función se estudiaron algunos inhibidores de EDI, fosfohidrolasas y ATPasas. Ninguna de las substancias estudiadas tuvieron efecto sobre la hidrólisis de ATP excepto 1 mM ortovanadato (un inhibidor de ATPasas, fosfatasas y de la degradación de insulina). La hidrólisis de ATP sigue una cinética Michaeles-Menten con Vmax: 570,45±113,08 pmol/Pi/h y un aparente Km: 63,13±3,48 µM. Los estudios demostraron binding de ATP y la cinética enzimática estableció un solo sitio de binding por molécula de EDI. Estudios PAGE de EDI y cross linking de EDI-125I-insulina en presencia de ATP indicaron que el ATP produce cambios conformacionales y agregación enzimatica. Los resultados permiten concluir que EDI posee actividad proteasa (degradación de insulina) y ATPasa y que el binding y la degradación de insulina son dependientes de la concentración de ATP.