Mecanismos moleculares de los efectos de RSUME sobre HIF-1

TEDESCO, L.; GEREZ, J.; FUERTES, M.; DRUKER, J.; SEVLEVER, G.; BARONTINI, M.; SILBERSTEIN, S.; SHAN, B.; RENNER, U.; STALLA G.K.; PAEZ PEREDA, M.; HOLSBOER, F.; ARZT, E.

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica, Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología 2011 y II Congreso AACYTAL.; 2011

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

HIF-1, factor de transcripción principal en la respuesta adaptativa a hipoxia, está compuesto por HIF-1beta, de expresión constitutiva y HIF-1alfa, subunidad que en normoxia es reconocida por la E3 ligasa de ubiquitina VHL y enviada a degradación vía proteasoma. En hipoxia, así como en patologías asociadas a deficiencia de VHL, este reconocimiento no ocurre, HIF-1alfa se estabiliza y ejerce su actividad transcripcional. En trabajos previos demostramos que RSUME, una proteína clonada en nuestro laboratorio, aumenta la expresión de HIF-1alfa y consecuentemente su actividad transcripcional.En este trabajo estudiamos los mecanismos moleculares por los que RSUME aumenta la expresión de HIF-1alfa, focalizándonos en la función de VHL. Utilizando el gen reportero ODD-luc, demostramos que RSUME aumenta un 200% los niveles de HIF-1alfa incluso cuando se sobreexpresa VHL (p menor a 0,05). Estos resultados fueron reconfirmados por ensayos de western blot. Por ensayos de co-inmunoprecipitación demostramos que RSUME y VHL interactúan físicamente, y que dicha interacción no depende de HIF-1alfa. Consecuentemente demostramos que RSUME inhibe la ubiquitinación de HIF-1alfa mediada por VHL. En el mismo sistema, demostramos que RSUME reduce la formación del complejo de ubiquitación de HIF-1alfa (VCB-VHL/Cul2/ElonginaC/B). Para estudiar el mecanismo de inducción de RSUME en hipoxia, se transfectaron células deficientes de VHL con el gen reportero RSUME-LUC y vectores de expresión de VHL, y observamos que VHL inhibe en un 60% la expresión de RSUME (p menor a 0,05). Utilizando muestras de hemangioblastomas y feocromocitomas humanos, así como en células RCC, demostramos altos niveles de expresión de RSUME en tumores. Concluimos que RSUME interacciona físicamente con VHL inhibiendo su función sobre HIF-1alfa, aumentando consecuentemente su estabilidad proteica y su actividad transcripcional, cumpliendo un rol muy importante en la respuesta adaptativa en condiciones de hipoxia.