El transporte de insulina al mitoplasto es dependiente de la degradación

CRESTO JC, CAMBEROS M, CAO G, MARTUCCI L

Mar del Plata - Argentina

Congreso; LV Reunión Anual de Investigación Clínica (SAIC),; 2010

Soc. Arg. de Investigación Clínica

Objetivos -En estudios previos observamos que la degradación limitaba la disponibilidad de insulina para su incorporación en mitoplastos, por lo tanto estudiamos el transporte y la degradación de insulina para determinar el grado de interacción.    Métodos - EDI se obtuvo de músculo de rata por sucesivos pasos cromatográficos. Mitocondrias hepáticas aisladas según Parson, fueron recuperadas e incubadas a 25ºC o 30ºC, oxígeno 100%, 125I-insulina (105 cpm) e insulina fría a tiempos y dosis variables. La reacción se detuvo con N-etilmaleimida 2 mM y los mitoplastos (M) se aislaron de la membrana externa y espacio intermembrana con digitonina. La degradación se determinó con TCA 5%, cromatografía en Sephadex G50 y anticuerpos específicos.   Resultados - A 25ºC la degradación fue mínima y la insulina se acumuló en M. A esta temperatura la interacción EDI-insulina y mitoplasto puede ser analizada como una reacción bimolecular, donde ambos complejos reaccionan independientemente siguiendo una cinética de 2do. orden (constante k, control: 0.496; IDE: 0.336, control+ Bacitracin:  0.681; IDE+Bacitracin 0.523; control+DNP: 0,505; IDE+DNP: 0,548). A 30ºC la acumulación de insulina en M fue menor y la degradación en el buffer de incubación fue total. Esto es, toda la insulina fue degradada en forma casi instantánea. Diez mil ng de insulina saturaron parcialmente el transporte pero no la degradación en el buffer de incubación. N-ethilmaleimida 0,1 mM e insulina hasta 10000 ng incrementaron el transporte a M sin modificar la degradación en el buffer de incubación. 1 mM de N-ethilmaleimide asociado a 10 ng de insulina logró disminuir la degradación en el buffer de incubación (control: de 87 a 56%, EDI: de 84 a 62%).    Conclusión: la magnitud y velocidad de la degradación es el mecanismo regulador en la incorporación de insulina al mitoplasto.