Procesamiento de insulina en mitocondrias – Su degradación

CAMBEROS M, CAO G, MARTUCCI L, CRESTO JC

Mar del Plata - Argentina

Congreso; XVII Congreso Argentino de Diabetes; 2010

Soc. Argentina de Diabetes

Nosotros observamos que la enzima degradante de insulina (EDI) transporta insulina a la mitocondria. Objetivos - Demostrar que las mitocondrias degradan insulina, regulando su incorporación.  Métodos - EDI se obtuvo de músculo de rata por sucesivos pasos cromatográficos. Mitocondrias hepáticas aisladas según Parson, fueron recuperadas e incubadas a 25ºC o 30ºC, oxígeno 100%, 125I-insulina (105 cpm) e insulina fría a tiempos y dosis variables, deteniendo la reacción con N-etilmaleimida 2 mM. Los mitoplastos (M) se aislaron con digitonina y la degradación se midió por cromatografía en Sephadex G50 Superfino. La insulina se detectó por su posición cromatográfica y con anticuerpos específicos. Resultados - A 30ºC la degradación de insulina fue mucho mayor que a 25ºC. A 25ºC EDI acumula insulina en M hasta los 300 seg. A 30ºC la acumulación en M (control y EDI) fue similar pero la degradación fue mayor con EDI. En el basal a 30ºC la degradación en el buffer de incubación mitocondrial fue total (tiempo experimental "0") con un pico de tirosina. Esto es, toda la insulina fue captada y degradada en forma casi instantánea. Estudios dosis/respuesta con dosis crecientes  de insulina (1 ng a 10 µg) mostraron que dosis farmacológicas de insulina saturan parcialmente el sistema de transporte y degradación. N-ethilmaleimida 0,1 mM incrementó la insulina en M y dosis/respuesta con N-ethilmaleimida (0,1-1 mM) disminuyó la degradación de insulina en el buffer de incubación. Conclusión- A 30ºC la degradación regula el transporte y la acumulación de insulina en el mitoplasto.