Posible participación de las especies reactivas del oxígeno (ROS) en la regulación por lactato (L) de

GALARDO MN; RIERA MF; REGUEIRA M; PELLIZZARI EH; CIGORRAGA SB; MERONI SB

Mar del Plata

Congreso; LV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Invetigación Clínica; 2010

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La espermatogénesis ocurre en un microambiente constituido principalmente por productos de secreción de las células de Sertoli tales como el L, sustrato energético de las CG. Previamente demostramos que en CG el L regula la expresión del transportador de monocarboxilatos 2 (MCT2) y la lactato deshidrogenada C (LDH C), proteínas involucradas en su propia metabolización. En células musculares se demostró que el L incrementa las ROS y la expresión de genes regulados por ROS. La posibilidad que L pueda ejercer un efecto similar en CG no ha sido aún analizada. El objetivo de este trabajo fue evaluar si L incrementa ROS y la participación de ROS en la regulación por L de señales de transducción y de la expresión génica. Se utilizaron CG (espermatocitos y espermátides) aisladas de testículos de rata de 31 días de edad. Las CG fueron cultivadas en condiciones control (C), en presencia de L 20mM y de L combinado con N-acetil-cisteína (NAC) 2mM que neutraliza las ROS. Los niveles de ROS se evaluaron por ensayo de TBAR determinando los niveles de malondialdehído (MDA), los niveles de PKB- y p38MAPK- fosforiladas (P) se determinaron por Western blot y los niveles de MCT2 y LDH C por Northern blot. Observamos que el L, al igual que el agua oxigenada, aumenta los niveles de MDA (C: 0.56±0.06, L: 0.92±0.10*, H2O2 500μM: 1.25±0.13* pmoles MDA/μg proteína/30min, X±DS, n=3, p<0.05). Asimismo, se vio que L incrementa los niveles de PKB-P y p38MAPK-P (PKB-P: 1.7±0.2 y p38MAPK:1.8±0.2 veces de estímulo respecto a C, X±DS, n=3). Al combinar L con NAC se observó un efecto inhibitorio en las señales activadas por L (PKB-P: 0.7±0.1 y p38MAPK-P: 1.1±0.1) y en la expresión de genes regulados por L a las 24 hs (MCT2; L: 2.2±0.3 vs L+NAC: 1.3±0.2) (LDH C; L:3.1±0.3 vs L+NAC: 2.5±0.2). Los resultados sugieren que L en CG produce un aumento de ROS y pone en marcha una respuesta celular que conduce a una mayor eficiencia en su metabolización.(PIP 2008 N° 806; PICT 2007 N° 1004).