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Display de epitopes foráneos en los vectores amplicon derivados del virus Herpes Simplex-1 (HSV-1).Introducción. Los vectores amplicon basados en el virus humano Herpes Simplex 1 (HSV-1) se han convertido en un sistema atractivo para ser usado tanto en terapia génica como en la producción de vacunas profilácticas. En este sentido, la expresión de quimeras entre pétidos específicos y proteínas de la superficie de HSV-1 involucradas en el attachment de este virus a la superficie celular tiene un uso potencial para el diseño de vectores herpéticos. La inserción de epitopes con ciertas características de unión o inmunológicas es útil para manipular la respuesta inmune o bien redireccionar la unión de HSV-1 hacia tipos celulares específicos. Para los vectores basados en HSV-1, existe la posibilidad de escindir y reemplazar el dominio de unión a heparan sulfato (heparan sulfate binding domain-HSBD) en la proteina responsable mayoritariamente del attachemnt, gC. El objetivo general del trabajo es evaluar vectores amplicón derivados de HSV-1 como un sistema de display de epitopes foráneos o de redireccionamiento a tipos celulares específicos. En este trabajo se construyó un amplicón de HSV-1 capaz de expresar en su superficie una gC modificada en la cual el HSBD fue reemplazado por un péptido que comprende los aa 140 a 160 de la proteína VP1 (péptido RGD) del VFA serotipo O1Campos. Metodologías y Resultados. El bácmido salvaje, HSVDpacD27, fue modificado empleando el método de selección y contraselección utilizando el cassette galK. En una primera etapa, el cassette galK flanqueado por secuencias homólogas a los aa 20-30 y 30-40 de la gC de HSV-1 fue insertado por recombinación homóloga en esta región específica del BAC (HSVDpacD27gC::galK). En un segundo paso de recombinación, el cassette fue removido y reemplazado por un oligonucleótido sintético que incluye el péptido de interés flanqueado por regiones homólogas a gC e idénticas a las incluidas en galK (HSVDpacD27gC::RGD). El ADN del BAC mutante fue aislado y caracterizado por mapeo de restricción con las endonucleasa HindIII y BstBI. Los amplicones producidos en células Vero2-2 transfectadas con el BAC modificado y el plásmido amplicón que expresa la proteína verde fluorescente (green flurescent protein - GFP) exponen una gC modificada con una movilidad electroforética menor a la glicoproteina salvaje. Para evaluar si estos amplicones son capaces de ensamblarse adecuadamente, se realizó un análisis por microscopía electrónica. El mismo reveló la presencia de partículas envueltas de HSV-1 con un tamaño aproximado de 180nm similares a los amplicones empaquetados con el BAC salvaje. Finalmente, se evaluó la capacidad de transducción del gen gfp en células Vero2-2 medida por estos amplicones. Los resultados indican que la misma resulta ser entre 2 a 5 veces menor comparado con los valores obtenidos para el amplicon salvaje. Conclusiones. Se desarrollaron amplicones derivados de HSV-1 que expresan en su superficie una gC modificada. Los stocks producidos con el BAC modificado producen efectivamente vectores amplicon con características morfológicas similares al salvaje. Si bien los mismos son capaces de transducir el gen gfp en celulas Vero2-2, lo hacen menos eficientemente que los amplicones salvajes indicando que la entrada a la célula se encuentra comprometida.