Avances en la obtención de una vacuna recombinante contra la hepetitis A

OTERO M; AGUIRRE S; D'ANTUONO A; ALVAREZ P; MATTION N

Córdoba - Argentina

Congreso; XXIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2009

Sociedad de Virología

Avances en la obtención de una vacuna recombinante contra la Hepatitis A. La hepatitis A es la más frecuente de las hepatitis del mundo. El virus de la Hepatitis A (VHA) pertenece a la familia de los picornavirus, genero hepatovirus. Este posee un genoma de ARN cadena positiva de aproximadamente 7500 bases que codifica para una poliproteína de 2227 aminoácidos, la cual es clivada por la proteasa viral 3C para generar las proteínas necesarias para la replicación y el encapsidamiento de la partícula viral. La vacuna contra la hepatitis A es actualmente la mejor protección contra la enfermedad. Estas vacunas son importadas y su valor es muy elevado, en parte debido a los altos costos de producción derivados del trabajoso proceso de cultivo in vitro, ya que VHA tiene un ciclo de replicación largo y no produce efecto citopático en cultivos celulares. El objetivo general del proyecto es evaluar diferentes sistemas de expresión, procariota y eucariota, para la producción de pseudo partículas virales del VHA. En este trabajo se amplificaron y clonaron la región de la poliproteína que codifica para la cápside viral (VP0, VP3, VP1-2A), y la proteasa viral 3C de la cepa de VHA HM175/18f (adaptada para replicar en cultivo) las cuales se ensamblaron en el mismo marco de lectura utilizando un sitio KpnI agregado mediante mutagénesis puntual. La cepa HM175/18f fue multiplicada en cultivos de células FRHK-4, donde el VHA se encuentra adaptado y produce efecto citopático.  La estrategia general consistió en la amplificación por RT-PCR de las regiones genómicas mencionadas, y su posterior ensamblado en el vector de clonado pGEMT-Easy.  Como templado se utilizó ARN viral extraído de cultivos infectados por HM175/18f utilizando Trizol®.  De esta forma se generó el plásmido pGEMT-Easy[P12A3C] que fue corroborado mediante  mapeo de restricción y secuenciamiento.  Conclusiones. Se lograron amplificar las regiones que codifican para las proteínas de la capside viral, P1-2A y para la proteasa viral, 3C. Se clonaron en el vector procariota PGEMT-Easy, en el cual se logró ensamblar el cassette de expresión P12A3C. El cassette P12A3C se utilizará para ser expresado en diferentes sistemas eucariotas y procariotas para su evaluación como antígeno vacunal.