DESARROLLO DE UNA ELISA DE BLOQUEO PARA EVALUAR ESPECIFICIDAD Y AVIDEZ DE ANTICUERPOS CONTRA EL VIRUS DE LA DIARREA VIRAL BOVINA

FRANCO, OLGA; COMBESSIES, GUSTAVO; OGAS, LORENA; SEKI, CRISTINA; ROBIOLO, BLANCA; LA TORRE, JOSÉ; GRIGERA, PABLO; CAPOZZO, ALEJANDRA.

Mar del Plata, Argentina

Jornada; Jornadas Internacionales de Veterinaria Pràctica; 2009

Colegio de Veterinarios de la provincia de Buenos Aires

INTRODUCCION La técnica que usualmente se utiliza para evaluar la respuesta inmune contra BVDV es la seroneutralización (SN). Sin embargo, este ensayo es laborioso y posee el riesgo de manipulación de cepas de virus vivas. Con el fin de tener una técnica in vitro a la prueba de SN, en este trabajo se desarrollo una ELISA de bloqueo multiespecie (B-ELISA) junto con una ELISA de avidez (AB-ELISA), para titulación de anticuerpos contra BVDV usando la Glicoproteína E2 de BVDV trucada producida en Baculovirus recombinante. E2 es la proteína mas inmunogénica de BVDV, obteniéndose altos títulos de anticuerpos neutralizantes después de la infección. MATERIALES Y METODOS Los niveles de anticuerpos séricos específicos se midieron por B y AB-ELISA, usando un suero de cobayo pre-titulado y altamente neutralizante. La ELISA fue validada con sueros de bovinos naturalmente infectados (muestras de campo) y ratones vacunados experimentalmente. RESULTADOS Al evaluar con B-ELISA un total de 71 muestras de suero de bovinos de campo, la sensibilidad y especificidad de la prueba fue del 100% y 91% respectivamente. Los títulos de B-ELISA se correlacionaron con seroneutralización (R2=0.91). La evaluación de avidez específica de IgG facilita la discriminación de muestras de suero altamente neutralizantes trabajando con una sola dilución, esto permite evaluar hasta 90 muestras en una placa. DISCUSION B-ELISA permite detectar anticuerpos anti-BVDV en sueros bovinos con una sensibilidad del 97% y una especificidad del 100%. Por su parte, AB-ELISA permite valorar la avidez de los anticuerpos anti BVDV. Sueros de bovinos infectados con alto índice de avidez poseen también altos títulos seroneutralizantes. El próximo paso es evaluar sueros de bovino vacunados, y compararemos los resultados con los obtenidos de animales infectados. Lo cual permitirá considerar la aplicabilidad de esta técnica para estudios experimentales o poblacionales (relevamientos epidemiológicos) diferenciación entre animales vacunados e infectados  y/o mediciones de eficacia en estudios de potencia vacunal. CONCLUSIONES Este es el primer reporte de una prueba de avidez que permite monitorear anticuerpos neutralizantes anti BVDV sin necesidad de utilizar cultivo celular o cepas de virus vivas. Las técnicas de ELISA desarrolladas posibilitan usar una misma plataforma serológica para evaluar sueros bovinos como de animales de laboratorio, de modo tal, que se puede facilitar los estudios preclínicos y las pruebas vacunales, de igual forma se pueden titular los sueros evaluados. BIBLIOGRAFÍA AYKUT O., et al. Maturation of Immunoglobulin G Avidity after Inactive gE Deleted Bovine Herpesvirus Type 1 (BHV-1) Marker Vaccination. Viral Immunol. (2008). 21(1): 3-11. MARZOCCA M. P., et al. Truncated E2 of bovine viral diarrhea virus (BVDV) expressed in Drosophila melanogaster cells: A candidate antigen for a BVDV ELISA. J. Virol. Meth. (2007). 144 (1-2): 49-56. GRIGERA, P., et al. Presence of bovine viral diarrhea virus (BVDV) E2 glycoprotein in VSV recombinant particles and induction of neutralizing BVDV antibodies in mice. Virus Research. (2000), 69: 3–15. Nota: Este Proyecto fue financiado en forma conjunta por la Agencia de Ciencia y Tecnología SECyT, CONICET y Tecnovax S.A. a través del PID 2006 No. 35468. Título: “Inmunógenos de última generación contra virus de impacto veterinario” (FONCyT – Tecnovax S.A.)