Desarrollo de un método para la detección de proteínas no estructurales del virus de la fiebre aftosa en suspensiones virales y vacuna comercial

RUSPI, DANIEL; OGAS CASTELL, LORENA; GONZALEZ, MARCELO; SEKI, CRISTINA; REMORINI, PATRICIA; PONTILLO, LUIS; MATTION, NORA; LA TORRE, JOSE

Buenos Aires

Congreso; IX Congreso Argentino de Virologia; 2008

Sociedad Argentina de Virologia

ANTECEDENTES: Las empresas productoras de vacunas veterinarias, requieren en forma continua la actualización de técnicas para el control de calidad y mejorar la potencia de las mismas. Durante el proceso de replicación en cultivos celulares o en animales infectados, se producen partículas 140s y proteínas no estructurales (PrNE). La presencia de anticuerpos contra las PrNE representa un marcador biológico de infección. Para poder diferenciar animales vacunados de animales infectados es necesario que las vacunas en uso no induzcan la producción de anticuerpos contra las PrNE. Por este motivo las vacunas que contienen PrNE son rechazadas por los servicios sanitarios de Sudamérica. Hasta el presente solo era posible determinar la presencia de PrNE mediante la detección de anticuerpos en animales vacunados. Si bien este método es adecuado lleva una considerable cantidad de tiempo (30-45 días). En este trabajo hemos desarrollado una técnica rápida y sensible para determinar la presencia de PrNE en las distintas etapas de producción y en el producto terminado. OBJETIVO: Desarrollar un método específico y altamente sensible para la detección de las proteínas no estructurales en suspenciones virales correspondientes a la producción de vacuna antiaftosa, utilizando antígenos recombinantes y anticuerpos monoclonales. MATERIALES Y MÉTODOS: Se llevaron a cabo ensayos de Western-Blot con muestras correspondientes a lotes de vacunas contra el virus de la fiebre aftosa y como controles se corrieron en paralelo proteínas recombinantes 3ABC y 3C mutadas en el sitio catalíco de la proteasa. Para cada una de las muestras se sembraron cantidades iguales, previamente se determinó la concentración viral por masa antigénica, de cada lote se sembraron 250 ng de virus. Las bandas correspondientes a las proteínas no estructurales se identificaron en una electroforesis bajo condiciones reductoras y luego se transfirió a una membrana de nitrocelulosa. Para la identificación se empleó un anticuerpo monoclonal anti-3ª, un monoclonal anti 3C y un suero policlonal de conejo anti 3C, el revelado se realizó por quimioluminiscencia. Se identificaron las proteínas no estructurales 3ABC y 3C las cuales tiene un peso molecular de 53 kDa y 27 kDa respectivamente.