Estudio de los factores de virulencia y atenuación de arenavirus del Nuevo Mundo mediante el empleo de clones infecciosos.

SEPÚLVEDA, CLAUDIA; FORLENZA MARIA BELEN; GOMEZ RICARDO; FOSCALDI SABRINA; LOPEZ NORA

Buenos Aires

Jornada; XXXVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología.; 2016

Sociedad Argentina de Virologia

16-Estudio de losfactores de virulencia y atenuación de arenavirus del Nuevo Mundo mediante elempleo de clones infecciosos. Forlenza, MB (1); Foscaldi, SA (1); Sepúlveda, CS (2); Gómez, RM (3); López, NM (1) (1) ICT Milstein-CONICET. (2) IQUIBICEN. CONICET-UBA. (3) IBBM.CCT-CONICET - LA PLATA. Losarenavirus del Nuevo Mundo incluyen virus patógenos para humanos como el virusJunín (JUNV), y no patógenos como el virus Tacaribe (TCRV), prototipo delgrupo. Los determinantes virales que influyen en la virulencia o atenuación deJUNV no han sido completamente dilucidados. El genoma de los arenavirusconsiste en dos segmentos de ARN de cadena simple (S y L), cada uno de loscuales usa una estrategia bisentido para codificar dos proteínas. El ARN Scodifica para la nucleoproteína (NP) y el precursor de las glicoproteínas deenvoltura (GPC), y el ARN L para la polimerasa L y la proteína matriz Z.Estudios anteriores de nuestro grupo han permitido desarrollar un sistema degenética reversa para rescatar TCRV infeccioso a partir de ADNc. En estetrabajo, se utilizó el clon infeccioso de TCRV para evaluar la relevancia de unsitio de clivaje para caspasas en la Nucleoproteína (ausente en TCRV), que seha propuesto como determinante para la capacidad de los arenavirus patógenos deinhibir la inducción de apoptosis en las células infectadas. Utilizando mutagénesisdirigida, el sitio de clivaje para caspasas fue introducido en un plásmido queexpresa la NP de TCRV. Se verificó que la NP mutante es capaz de sostener lareplicación del ARN viral mediante un sistema de minireplicón. Luego, lasecuencia codificante de la NP mutante fue introducida en el plásmido pSag, quecodifica para el segmento S de TCRV. El plásmido resultante (pSagCAS), o elpSag salvaje, fueron transfectados junto con el plásmido que codifica para elsegmento L (pLag) en células BHK-T7, para generar TCRV infeccioso mutante osalvaje, respectivamente. Los sobrenadantes de cultivo de las célulastransfectadas fueron utilizados para amplificar la progenie viral mediante lainoculación de monocapas de células BHK21. El virus recombinante presente enlos sobrenadantes fue titulado mediante el ensayo de placas. Se establecieronlas condiciones óptimas para evaluar la capacidad de los virus obtenidos deinducir apoptosis en células A549 por la técnica de tinción con naranja deacridina y bromuro de etidio. Los cultivos celulares fueron infectados por 72hs y se determinó el número de células apoptóticas presentes en cada caso. Elcomportamiento in vivo de los virus mutantes será analizado en un modeloanimal.