Uso de secuencias N-terminales de la proteína 3ABC fusionadas a un carrier de GFP para detectar animales infectados con el Virus de la Fiebre Aftosa.

CM LOTUFO,; PR GRIGERA; M WILDA,; NM MATTION

Rosario, Santa Fe, Argentina

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología ALAM-CAM 2016, IV Congreso Latinoamericano de Microbiología de Medicamentos y Cosméticos; 2016

SAM

La fiebre aftosa (FA), causada por el virus de fiebre aftosa (VFA), familia Picornaviridae, es una enfermedad altamente contagiosa y con gran impacto económico en la industria ganadera de animales rumiantes biungulados. El genoma del VFA codifica para proteínas capsidales (VPs) y no estructurales (NS), derivadas de la poli proteína original, y generadoras de respuesta humoral especifica en animales infectados. Las proteínas no estructurales 3ABC y 3D, originadas por clivaje del precursor P3, han sido utilizadas históricamente para diferenciar inmunológicamente animales infectados de vacunados ya que solo los primeros son expuestas a ellas. Nuestro grupo de investigación desarrolló oportunamente un ELISA test (3ABC-ELISA) basado en 3ABC recombinante y en el monoclonal de captura 3H7 (Mab3H7) que ha probado ser una herramienta de valor para la autoridad sanitaria. Con el objetivo de mejorar su performance exploramos en nuestro trabajo variantes del test que permitan 1) acortar los tiempos de análisis y 2) ajustar el ratio señal/ruido de cada suero particular y aumentar la especificidad de la determinación. Para ello hemos identificado una secuencia de 29 aminoácidos N terminales de la proteína 3A (29aa3A, capaz de unir el MAb3H7 en Western blot) que utilizada junto con 3ABC en un ELISA test de competencia permite discriminar, en cada suero bovino individual, el componente inespecífico (anti proteínas bacterianas contaminantes en la preparación de 3ABC) de la señal especifica originada por la infección con VFA.En paralelo también evaluamos la performance de un test de ELISA directo utilizando independientemente las proteínas de fusión 3A-GFP,19aa3A-GFP, 29aa3A- GFP, 38aa3A-GFP como antígenos reactivos y la proteína GFP.GST como control de anticuerpos inespecíficos.Los resultados indican que : 1) nuestro enfoque es válido para discriminar el componente inespecífico de cada suero individual en el test 3ABC- ELISA 2) el formato de ELISA directo usado, con las diferentes secuencias antigénicas fusionadas con el carrier GFP , en particular 3A-GFP, presenta ventajas en lo que refiere al tiempo de análisis y a la relaciónseñal/ruido de cada suero individual y 3) el uso de un test basado en 3A, que carece de la región que codifica para la proteasa 3C, minimiza problemas asociados con el mantenimiento del antigeno recombinante y su posible autodegradación.Palabras clave: fiebre aftosa, virus de la fiebre aftosa, proteína 3A, proteína 3ABC, monoclonal 3H7, 3ABC-ELISA.