Construcción de un Replicón de Semliki Forest Virus codificante para la glicoproteína G de VSV y evaluación de su capacidad para inducir respuesta inmune especifica en ratones.

OGAS CASTELLS, MARÍA LORENA; SCODELLER, EDUARDO; GRIGERA, PABLO

Buenos Aires, Argentina

Congreso; IX Congreso Argentino de Virología; 2008

Sociedad Argentina de Virología - Asociación Argentina de Microbiología

INTRODUCCIÓN: La vacunación antiviral es un elemento clave en el control sanitario/epidemiológico de poblaciones humanas y animales. En numerosos casos, sin embargo, las estrategias clásicas que utilizan virus inactivado/atenuado o las alternativas con subunidades recombinantes no han sido todo lo efectivas que se esperaba en inducir protección contra virus de relevancia. En este contexto  la inmunización con replicones de Semliki Forest Virus (SFV) híbridos, donde  la secuencia de un inmunógeno de interés reemplaza a la secuencia de las proteínas estructurales y es expresada a partir del promotor temprano de citomegalovirus (CMV), se presenta como una estrategia alternativa de gran potencial vaccinológico.   OBJETIVO: Desarrollar un  protocolo  de inmunización genética con un replicón viral híbrido de SFV codificante para la glicoproteína G, el mayor inmunógeno  del virus de la estomatitis vesicular (VSV)  e inductor de neutralización viral  y protección en animales de granja.   MATERIALES Y METODOS: La construcción del replicón viral se realizó colocando el promotor temprano de Citomegalovirus río arriba de la replicasa viral, luego bajo el promotor secundario viral se ubicó al gen de la glicoproteína G de VSV y por último una secuencia de poliadenilación eucariota. Una vez corroborada la secuencia de la construcción, se realizaron transfecciones para evaluar si el replicón obtenido es funcional. Se analizó la presencia del gen por western utilizando un suero policlonal. Luego de esto se procedió a evaluar la capacidad del replicón de inducir una respuesta inmune.Se inoculó un grupo de 5 ratones Balb/c hembras con 2 dosis de DNA (50 ug) correspondiente al replicón viral codificante para la glicoproteína G y como control de inoculó otro grupo de las mismas caracteristicas con el replicón viral codificante para B-galactosidasa (dos inoculaciones de 50 ug de DNA). La respuesta inmune fue evaluada por la técnica de ELISA. En la misma se fijo a la placa virus VSV inactivado, luego se colocaron diluciones de los sueros de los diferentes animales inoculados y finalmente se reveló con un anticuerpo conjugado a peroxidasa.   CONCLUSIONES: El replicón híbrido construido es capaz de expresar una proteína G funcional en células transfectadas acorde con lo mostrado en el análisis de Western blot de lisados celulares. El suero policlonal específico reveló la presencia de una proteína con el peso molecular esperado (50-55 Kd) que presenta variaciones en el grado de migración en geles reductores y no reductores típica de glicoproteínas. Se observó título de anticuerpos en los animales inoculados con el replicón codificante para la glicoproteína G  significativamente mayor que el basal de los animales control  inoculados con el replicón control codificante para el antígeno modelo B-galactosidasa. Se planea en el futuro cercano evaluar la inmunidad celular generada por este replicón en esquemas de inmunización "prime-boost", en donde la inoculación inicial con replicón especifico ( "priming") es seguida  por un "boost" (refuerzo)  con cantidades subóptimas de  antígeno proteíco homólogo.