Desarrollo de una plataforma para la producción de vacunas virales. Caso: vacuna antirrábica para humanos

PALACIOS C.A.; DE NICHILO A.; LARGHI O.P.; PAROLA A.D.

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología y II Congreso Latinoamericano de Virología; 2015

Sociedad Argentina de Virología (SAV)

La rabia es una zoonosis aguda ocasionada por virus del genero Lyssavirus, siendo letal en casi el 100% de los casos. Infecciones con el virus rábico causan al menos 55.000 muertes anuales en el mundo, aunque en el mismo período más de 15 millones de personas reciben tratamiento con vacunas antirrábicas. En nuestro país aún se producen vacunas para humanos a partir de cerebro de ratón y de rata lactantes, a pesar de haber sido desaconsejadas por la OMS desde 1984. Los avances en los sistemas de cultivos de células para la propagación de virus han llevado a un gran incremento en el desarrollo de vacunas virales. En particular, Vero es la línea celular continua con mayor aceptación por las autoridades regulatorias para la producción de vacunas para humanos. La misma ha sido utilizada por más de 30 años para la producción de vacunas contra poliovirus y el virus de la rabia y más recientemente para vacunas contra rotavirus, viruela, influenza, hepatitis A y encefalitis Japonesa. Establecer una plataforma de producción de vacunas virales para su uso en humanos es de gran interés para la industria nacional, permitiendo abrir un camino que pueda abastecer en un futuro, el mercado de vacunas local y regional. En este sentido, el objetivo del siguiente trabajo ha sido establecer una plataforma de cultivos celulares en un biorreactor a escala piloto, la puesta a punto de un proceso de producción del antígeno rábico, y el desarrollo de metodologías analíticas para control de proceso y de calidad. En este trabajo se muestran los resultados obtenidos en lotes pilotos, donde inicialmente se cultivaron células Vero sobre microesferas alcanzando una densidad de 2,5 - 3,5 x 106 células/ml. Las células se obtuvieron de un banco maestro de células Vero (CCL 81 ATCC) con controles de esterilidad e identidad celular (por secuencia y perfil de isoenzimas). El desarrollo del cultivo se monitoreó por recuento de núcleos, y se realizó un seguimiento de metabolitos (glucosa y lactato). Las células Vero se infectaron con la cepa Pitman Moore del virus rábico a una multiplicidad de infección de 0,1 y se monitoreó el avance de la infección cualitativamente por medio de inmunofluorescencia y estado del cultivo, y cuantitativamente por medio de contenido de glicoproteína viral. La productividad mínima de los procesos pilotos fue de 12.000 dosis de vacuna antirrábica para humanos (previo a su purificación) y 30.000 dosis de vacuna para animales. Es importante destacar que la plataforma de cultivo de células Vero desarrollada en nuestro laboratorio, puede ser empleada en el futuro para propagar otros virus o vectores virales como agentes vacunales, tanto de interés veterinario como de medicina humana.