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El virus de Hepatitis A (VHA) pertenece a la familia Picornaviridae, siendo el único representante del género Hepatovirus. Generalmente presenta un fenotipo de replicación lenta sin producción de efecto citopático (ecp) en células en cultivo. Se conoce que estas características están dadas por determinantes génicos involucrados en la replicación, por una alta tasa de uso de codones raros que retrasan la traducción de la poliproteína viral, así como también por factores del ambiente brindado por la célula huésped. La vacunación contra HA es obligatoria en Argentina desde hace dos años, siendo la provisión de vacunas exclusivamente de origen importado. Las vacunas existentes están formuladas con virus completo purificado e inactivado y son altamente inmunogénicas. Con el fin de generar una cepa vacunal de VHA utilizable para producir vacunas en el país, se propuso lograr una cepa viral con alta tasa de replicación en una línea celular aprobada como sustrato para producción de vacunas humanas (células Vero). Se secuenciaría el genoma de esta cepa viral en forma completa al inicio y al final del proceso de adaptación a replicación en células Vero a fin de detectar algunos cambios que pudieran estar involucrados en esta adaptación. La propuesta fue generar además una copia completa del genoma viral en ADN (cADN) del virus adaptado, para transcribir ARN simil genómico que fuera capaz de producir virus infeccioso luego de transfección en células Vero. De esta forma, se lo utilizaría en la generación de semillas de producción de vacunas libre de agentes adventicios. Metodología y Resultados: Se partió de la cepa de VHA denominada HM-175/43c que es capaz de replicar y producir efecto citopático en células de riñón de mono Rhesus, FRhK-4 ( fenotipo rr+/ecp+). Estas células no se pueden utilizar en la producción de virus destinado a vacunas humanas. Con dicha cepa viral se realizaron pasajes sucesivos en células Vero hasta alcanzar títulos virales similares a los producidos en células FRhK-4, por un lado, y al mismo tiempo lograr que se fueran acortando los tiempos de replicación en cada subcultivo. Se llevó a cabo la adaptación de la cepa de Virus de Hepatitis A HM-175/43c en células Vero luego de 15 pasajes sucesivos, lográndose títulos virales de 109,5 dosis infectivas en cultivo celular 50% (DICC50%). A la vez, los tiempos de cada subcultivo fueron variando desde los 43 días post infección (dpi) hasta solo 7dpi, en los últimos pasajes. La cepa así adaptada no produjo ecp en células Vero, pero afortunadamente conservó su capacidad citopática en células FRhK-4 luego de los 15 pasajes. De esta forma, se pudo titular con facilidad en este substrato alternativo. Tanto la cepa original como la adaptada a células Vero fueron secuenciadas en su totalidad. Se purificó ARN genómico y se amplificaron los genomas virales respectivos por RT-PCR, se clonaron en plásmidos pGEM-T. Se secuenciaron al menos tres clones de cada fragmento genómico, se compararon las secuencias entre si y con algunos existentes en el GeneBank y se identificaron algunas mutaciones que podrían estar involucradas en dicha adaptación.. Por otro lado, el genoma completo del clon adaptado, amplificado por RT-PCR en 4 fragmentos solapados fueron unidos utilizando sitios específicos de corte de enzimas de restricción presentes naturalmente en el genoma, más un sitio KpnI que se generó deliberadamente un como marcador molecular del clon adaptado. De la unión de estos 4 fragmentos se obtuvo una copia genómica completa en cADN, denominada fl-HAV-1, clonada en el vector pBR322.