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INTRODUCCIÓN: La vacunación antiviral es un elemento clave en el control sanitario/epidemiológico de poblaciones humanas y animales. En numerosos casos , sin embargo, las estrategias clasicas utilizando virus inactivado/atenuado o las alternativas usando subunidades recombinantes no han sido todo lo efectivas que se esperaba en la induccion de respuestas protectivas contra virus de relevancia. En los ultimos anos ha cobrado popularidad una nueva estrategia vacunal denominada prime-boost que combina una primera inoculación de DNA plasmidico codificante del antigeno de interes seguido de un refuerzo con el mismo antígeno en forma de proteina y que ha demostrado alta eficiencia en promover inmunidad específica . En este esquema la inmunización con replicones de Semliki Forest Virus (SFV) híbridos conteniendo antígenos de interes en reemplazo de las proteínas estructurales y bajo control de un promotor eucariota, se presenta como una alternativa de gran potencial vaccinológico. OBJETIVO: obtener protocolos de inmunización de genética con un replicon viral de SFV seguidos por inoculaciones de antigenos recombinantes utilizando como modelo B-galactosidasa MATERIALES Y METODOS: La construcción del replicón viral se realizó colocando el promotor temprano de Citomegalovirus rio arriba de la replicasa viral, luego bajo el promotor secundario viral se ubico al gen de B-galactosidasa y por ultimo una secuencia de poliadenilación eucariota. Una vez corroborada la secuencia de la contrucción se realizaron transfecciones para evaluar si el replicón obtenido es funcional. Se analizó la presencia del gen reportero (B-galactosidasa) por western (utilizando un anticuerpo comercial), se midio actividad enzimática de la misma, y se realizaron tinciones en células fijadas. Luego de esto se procedio a evaluar la capacidad del replicón de inducir una respuesta inmune. Se inocularon grupos de 5 ratones Balb/c con DNA (100 ug) correspondiente a los replicones virales codificantes para el B-galactosidasa y posteriormente se les aplico una dosis de proteína recombinante homologa (15 ug) en adyuvante oleoso. Como control de inocularon grupos de ratones solamente con el replicon viral (tres inoculaciones de 100 ug de DNA), solamente con proteína recombinante (tres inoculaciones de 15 ug en adyuvante oleoso), o con un replicón que expresa un antigeno diferente (100 ug) seguido de un boost con una proteína heterologa también en adyuvante oleoso. Las respuesta inmune fue evaluada por la técnica de Elisa. En la misma se fijo a la placa proteína recombinante B-galacosidasa luego se colocaron los diluciones de los sueros de los diferentes animales inoculados, finalmente se reveló con un anticuerpo conjugado a peroxidasa. CONCLUSIONES:La funcionalidad del replicón construido se evaluó por la técnica de western blot, para el revelado se utilizó un anticuerpo comercial, se verificó que la proteína marcadora tiene el peso molecular esperado, se midió la actividad enzimática de la misma y se realizaron tinciones de células fijadas. Se observo titulo de anticuerpos en todos los grupos inoculados con antigeno B-galactosidasa comercial o los replicones que codifican para el mismo. la respuesta. Los mayores títulos fueron alcanzados por el grupo de ratones inoculado en tres oportunidades con proteína recombinante, luego siguio el grupo inoculado inicialmente con DNA correspondiente a los replicones y un ultimo boost de proteína recombinate y el de menor en el grupo inoculado primero con DNA y posteriormente con proteína especifica. Estos datos seran utilizados para diseñar nuevas pruebas de prime boost utilizando replicones que expresan antigenos de interes veterinario como por ejemplo el gen correspondiente a la glicoproteína E2 del virus de la diarrea viral bovina (BVDV) y el de la glicoproteina G del virus de la estomatitis vesicular (VSV).