Estudio del rol de las regiones genómicas no codificantes en la regulación de la traducción de los ARN mensajeros de arenavirus

FOSCALDI SABRINA; D'ANTUONO, ALEJANDRA; LOPEZ, NORA

Vaquerias, Cordoba.

Jornada; Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2012

Sociedad Argentina de Virologia -SAV, AAM-

La familia Arenaviridae incluye virus patógenos productores de fiebres hemorrágicas en humanos, entre los que se destaca el virus Junín, agente causal de la fiebre hemorrágica argentina. Esta familia incluye además virus no patógenos como el virus Tacaribe, prototipo del grupo de arenavirus del Nuevo Mundo, que posee una estrecha relación filogenética y antigénica con el virus Junín. El genoma de los arenavirus codifica para cuatro proteínas, que se expresan a partir de ARN mensajeros (ARNm) subgenómicos. Esos ARNm contienen una región 5’ no codificante que posee estructura Cap. Además, presentan una región 3’ no codificante, que carece de poliA, cuya secuencia es rica en GC y permite predecir la formación de una estructura estable de tipo tallo-bucle. Este trabajo tiene como objetivo analizar el rol de las secuencias no codificantes 5’ y 3’ de los ARNm virales en su traducción, usando como modelo de estudio al virus Tacaribe. Con ese fin, se generó una construcción en la cual el marco abierto de lectura del gen reportero Luciferasa se encuentra flanqueado por las secuencias 5’ y 3´ no codificantes de uno de los ARNm del virus Tacaribe. Esa construcción fue clonada bajo el control del promotor de la ARN polimerasa del fago T7. Sobre la base del plásmido obtenido, se generaron mutantes con deleciones o substituciones en las secuencias no codificantes. Estas construcciones se emplearon como molde en reacciones de transcripción in vitro realizadas en presencia del análogo de Cap (m7G(5´)ppp(5´)G) y la enzima ARN polimerasa T7. Luego de su purificación, el transcripto salvaje o cada uno de los ARNm mutantes fueron transfectados en células eucariotas, y la eficiencia de traducción del gen reportero fue evaluada mediante la determinación de la actividad de Luciferasa en los lisados celulares. Los resultados mostraron que la deleción de la secuencia 3’ no codificante redujo los niveles de expresión de la proteína reportera, mientras que la remoción de la región 5’ no codificante resultó en niveles indetectables de actividad de Luciferasa. Estos resultados sugieren que las regiones no codificantes 5’ y 3’ de los ARNm contienen elementos que participan en la traducción de las secuencias codificantes. Esta metodología nos permitirá evaluar la relevancia de estructuras o de motivos de secuencia, así como la implicancia de las proteínas virales, en la eficiencia de traducción de los ARNm de arenavirus.