Importancia de las regiones no codificantes del genoma del virus Tacaribe

D´ANTUONO A; LOUREIRO ME; FOSCALDI S; LÓPEZ N

Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Virología 2011 - CAV 2011; 2011

Los Arenavirus, tales como el virus Tacaribe (TCRV), son virus envueltos cuyo genoma está constituido por dos segmentos de ARN de cadena simple que codifican para la nucleoproteína (N), el precursor de las glicoproteínas de envoltura, una ARN polimerasa ARN dependiente (L) y para la proteína matriz, Z. Ambos segmentos genómicos se asocian a numerosas copias de N formando las nucleocápsides, que funcionan como templado para la replicación del genoma viral. Recientemente se ha demostrado que la deleción de secuencias 5? y/o 3? no codificantes (5? NC o 3? NC), internas a la región promotora (19 nt terminales, P19), resulta en la atenuación del crecimiento en cultivo y de la virulencia in vivo del virus Lassa recombinante obtenido a partir de ADNc, señalando la importancia de dichas regiones. No obstante, la contribución relativa de las regiones no codificantes, el tipo de  señales involucradas y el mecanismo implicado en el fenotipo observado no han sido esclarecidos aún.  Más aún, su rol durante la incorporación de las nucleocápsides a los viriones generados en el curso de la infección por arenavirus, es desconocido.  El presente trabajo se orientó a caracterizar los determinantes de secuencia de las regiones 5?NC y 3?NC, críticos para la transcripción y/o replicación del ARN  viral así como también para el ensamblado de partículas infectivas. Mediante un análisis bioinformático identificamos motivos conservados en las regiones NC de los arenavirus del Nuevo Mundo, que fueron seleccionados como blanco de mutagénesis. La habilidad de sostener la replicación y transcripción de ARNs análogos al ARN S de TCRV (minigenomas, MG) con deleciones totales o parciales en el 5?NC y 3?NC, fue evaluado por medio de un sistema de genética reversa.  Además, por medio de ensayos de infectividad se determinó la eficiencia de incorporación de los distintos MG mutantes a partículas de tipo viral (VLPs). Los experimentos realizados nos permiten concluir que el 5?NC contiene señales río abajo a la región promotora P19, que son esenciales para la replicación y/o transcripción del genoma viral. El rol de dichas secuencia en el ensamblado de partículas infectivas será discutido.