Desarrollo de un ELISA de dilución única para el estudio de la avidez de anticuerpos séricos específicos contra el virus de la fiebre aftosa (VFA) en sueros bovinos

LAVORIA, MARÍA DE LOS ÁNGELES; DI GIACOMO, SEBASTIÁN; BUCAFUSCO, DANILO; FRANCO MAHECHA, OLGA LUCÍA; PÉREZ FILGUEIRA, D MARIANO; ALEJANDRA CAPOZZO

Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Virología; 2011

AAM

Introducción: La protección contra el virus de la Fiebre Aftosa (VFA) en bovinos correlaciona con el título sérico de anticuerpos específicos, tanto totales (medidos por ELISA fase líquida, LP-ELISA) como neutralizantes (evaluados por seroneutralización, sn) sin embargo se han observado discrepancias entre estas determinaciones y la protección real frente a la enfermedad, que se agudizan al estudiar la protección cruzada. Las características cualitativas más que la cantidad de anticuerpos podrían explicar estas diferencias. Nuestro propósito es desarrollar técnicas estandarizables de alto rendimiento que permitan evaluar las características de los anticuerpos involucrados en protección. Objetivo: Desarrollar un ELISA que permite evaluar la avidez de los anticuerpos anti VFA en bovinos, y establecer su capacidad de diferenciar animales protegidos de no protegidos en ensayos de potencia vacunal. Metodología: Se establecieron las condiciones de un ELISA indirecto de avidez (AI- ELISA), utilizando virus inactivado purificado de los serotipos O1 Campos, A 24 Cruzeiro, C 3 Indaial and A/Arg/01 fijo en la placa. El suero se ensaya en una única dilución (1/50), con y sin tratamiento con urea 7M (45 muestras por placa). El índice de avidez (IA %) se calcula comparando los valores de DO de la muestra tratada y sin tratar con urea. Se determinó la cinética de la avidez de los anticuerpos en sueros de animales vacunados dos dosis de vacuna comercial (espaciadas 30 días), en 32 bovinos inmunizados con vacuna monovalente (o1 Campos, 20 y 60ug) desafiados con la misma cepa; y de 64 bovinos inmunizados con vacuna conteniendo la cepa A24 Cruz, desafiados con A/Arg/01. Resultados: El estudio de la cinética de la maduración de la avidez de los anticuerpos específicos muestra que luego de la primera dosis el iA se mantiene bajo (20%) para todos los serotipos excepto para O1campos, que posee mayor masa antigénica que los otros serotipos, y alcanza valores promedio de IA=45%. La avidez se incrementa gradualmente luego de la segunda dosis hasta alcanzar el 100% hacia los 60 días post vacunación. La prueba de desafío homólogo mostró que los animales vacunados que no resultaban protegidos, tenían bajos niveles de avidez. Los animales inmunizados con vacuna monovalente conteniendo A24 Cruzeiro que no resultaron protegidos al desafío con virus A/Arg/01 tenían en general menores índices de avidez en sus anticuerpos que los protegidos, sin embargo estas diferencias no resultaron ser significativas. Conclusiones: La avidez de los anticuerpos anti VFA medido por Ai-eLisA se incrementa con el número de dosis vacunales aplicadas y aumenta más rápidamente con una sola dosis si se incrementa la masa antigénica de la vacuna. Los animales vacunados que no superan el desafío con la cepa homóloga poseen anticuerpos de baja avidez (Ai