ICT - MILSTEIN   05483
INSTITUTO DE CIENCIA Y TECNOLOGIA "DR. CESAR MILSTEIN"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Optimización de un ELISA para medir niveles de interferón-γ como resultado de la inmunización con diferentes serotipos del virus de fiebre aftosa en bovinos.
Autor/es:
BUCAFUSCO, DANILO; DI GIACOMO, SEBASTIÁN; PEGA, JUAN; MALACARI, DARÍO; SCHAMMAS, JUAN MANUEL; SMITSAART, ELIANA; LEVY, SUSANA; ALEJANDRA CAPOZZO; PÉREZ FILGUEIRA, D MARIANO
Reunión:
Congreso; X Congreso Argentino de Virología; 2011
Institución organizadora:
AAM. Sociedad Argentina de Virología
Resumen:
ntroduccion: La amplia diversidad antigénica del Virus de
Fiebre Aftosa (VFA) y la escasa la protección cruzada entre
variantes, obliga a un constante monitoreo y eventualmente
actualización de las cepas vacunales en relación a las que
circulan regionalmente. si bien existe información sobre la
reactividad cruzada de anticuerpos entre tipos y subtipos del
VFA, poco se sabe sobre la capacidad particular de cada
serotipo de activar respuestas celulares en animales vacunados
con virus homólogos o heterólogos. objetivo: evaluar la
producción de IFN-γ como resultado de la inmunización de
bovinos con diferentes serotipos de VFA. Metodología: Para
evaluar este tipo de respuestas se adaptamos y estandarizamos
para medición de inmunidad celular contra el VFA, un ELISA
comercial Bovigam® (Prionics) diseñado para detectar IFN-γ
bovino inducido por antígenos de Mycobacterium tuberculosis.
Para la puesta a punto se utilizaron 283 bovinos vacunados
y 106 bovinos näive. utilizando sangre de estos animales se
probaron diferentes concentraciones VFA inactivado y purificado
de las cepas o1C, A24, A2001, A87 y C3i. Comprobamos que la incubación de la sangre entera (750 μl) durante 16-24h
con 10µg/ml de virus purificado y como controles el mitógeno
Pokeweed (PWM) (10 μg/ml) o PBs (+ y -, respectivamente),
daba los resultados más consistentes y repetibles. se
traspasan luego 50 μl de sobrenadante (plasma) a las placas
de detección del kit. el resto del ensayo se realiza siguiendo
las instrucciones del fabricante y se incluye una curva estándar
con concentraciones conocidas de IFN-γ bovino recombinante
(Abd serotec). Finalmente, el ensayo fue utilizado en pruebas
vacunales de potencia y de vaccine matching para los serotipos
o y A. resultados: Se fijaron los límites de detección de la
técnica desde 0,195 a 25 ng/ml de IFN-γ. La estimulación con
PWM actúa como control de la viabilidad y funcionalidad de las
células, estableciendo como muestras válidas las que producen
> 3,2 ng/ml de IFN-γ con PWM y