Mejoras en vacunas anti-aftosa génicas y peptídicas para bovinos

CAPOZZO, ALEJANDRA VICTORIA; LAVORIA, MARÍA DE LOS ÁNGELES; BUCAFUSCO, DANILO; WILDA, MAXIMILIANO; FRANCO MAHECHA, OLGA LUCÍA; MANSILLA, FLORENCIA; PÉREZ FILGUEIRA, D MARIANO

Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Virología; 2011

Sociedad Argentina de Virología

Las vacunas peptídicas contra el Virus de la Fiebre Aftosa (VFA) utilizan a la secuencia blanco de la respuesta neutralizante, el sitio antigénico A (ASA) comprendido entre los aa 139-149 de la proteína capsidal VP1. ASA presenta diversas conformaciones sobre el virión y cada una de ellas posee una antigenicidad particular que debe ser adoptada por los antígenos peptídicos . Las vacunas peptídicas deben adoptar una o más de estas múltiples conformaciones para ser efectivas. Por otro lado, la inmunización de bovinos se ve interferida par la dificultad de lograr una estimulación adecuada de células de T, debido al marcado polimorfismo del MHC de los bovinos (BoLA). Para superar estas limitaciones, ideamos un antígeno quimérico que fuera capaz de exponer adecuadamente al ASA y de proveer epitopes T funcionales en bovinos. La construcción G-ASA contiene la glicoproteína G del Virus de la Estomatitis Vesicular como portadora de un dímero en tándem del ASA (VFA, serotipo C3 Indaial). La inserción fue realizada en un sitio expuesto del ectodominio del extremo N-terminal de G, flanqueado por epitopes T. El modelado de G-ASA basado en datos cristalográficos, mostró que al colocar un dímero de ASA, al menos una de las dos secuencias adquiría una configuración expuesta en la superficie de la molécula quimérica. G-ASA fue expresada en el sistema de Baculovirus recombinante/células de insecto para producir una proteína quimérica (DEL BAC) y también preparada como vacuna génica (pC DEL). La funcionalidad de los epitopes de células T bovinas presentes en DEL BAC fue comprobada in vitro, mediante la activación de la secreción de IFN-γ específica en células mononucleares de sangre periférica de bovinos inmunizados con vacuna comercial anti-aftosa. Grupos de cinco teneros fueron inmunizados con 150µg de pC DEL en PBS, 30µg de DEB BAC, 5µg de VFA-C3 inactivado (en adyuvante oleoso) o placebo. La aplicación de dos dosis de DEL BAC estimuló títulos séricos de anticuerpos neutralizantes anti-VFA compatibles con una expectativa de protección superior al 90%, siendo IgG1 el principal isotipo inducido. La vacuna génica (pC DEL) indujo seroconversión luego de una sola dosis, con altos niveles de IgG1. Los anticuerpos séricos de los terneros vacunados con DEL BAC y pC DEL reaccionaron fuertemente con el virus nativo en ensayos de ELISA, inmunoprecipitaron partículas virales 140S y neutralizaron la infección por VFA in vitro. Los resultados demuestran que la construcción quimérica G-ASA, como vacuna peptídica o génica, constituye alternativa para el desarrollo de vacunas anti-aftosa para bovinos. La mejor inmunogenicidad de esta construcción, respecto a la utilización del ASA asociado a epitopes T ubicuos, se debería al tamaño de la proteína quimérica, su capacidad que reproducir una o más de las conformaciones nativas de ASA, y a la funcionalidad de los epitopes T bovinos provistos por la glicoproteína G.