Gold nanoparticles as potential photosensitizers for Photodynamic antibacterial chemotherapy (PACT).

JAZMÍN SILVERO; BECERRA, MARÍA; ARGÜELLO, GERARDO ANÍBAL

Cordoba

Encuentro; II Reunión de Fotobiólogos Moleculares Argentinos; 2013

Soc. Argentina de Fotobiologia

En este trabajo se ha analizado el potencial de las nanopartículas de oro como fotosensibilizadores para la PACT [1]. Para ello, se han sintetizado distintos tipos en solución acuosa mediante reducción por citrato, por borohidruro de sodio y por el radical Irgacure 259. Mediante ensayo de inhibición por el método de los cilindros, se determinó que los tres tipos de nanopartículas no inhibieron el crecimiento de Staphylococcus aureus ATCC 29213 en concentraciones de hasta 2M. Se procedió entonces a realizar ensayos de fotoinhibición utilizando la cepa mencionada con las nanopartículas (AuNPs) sintetizadas con borohidruro por ser las más estables. Para ello, se incubó a temperatura ambiente y en la oscuridad el inóculo bacteriano y las nanopartículas en una proporción 50:50 durante 6 horas y posteriormente se irradió el wellplate durante 18 horas respectivamente con un arreglo de LED´s de 525 nm para excitar el plasmon de las nanopartículas. Como control negativo se utilizó buffer fosfato salino de pH=7 y como control positivo ciprofloxacina 0,5 mg/ml. Así también se procesaron en paralelo controles negativos de las mismas muestras sin irradiación. Se tomaron 20 uL de cada wellplate y se sembraron en placas de agar Mueller Hinton y se incubaron a 35 °C durante 24 h. Se observó una inhibición completa del crecimiento bacteriano en las muestras tratadas con AuNPs e irradiadas (inhibición > 3 log10 comparado con el control sin AuNPs). Para poder determinar si existía algún tipo de interacción de las nanopartículas con la pared bacteriana, se puso a punto la metodología para la preparación de las muestras para microscopía electrónica (TEM). Con este objetivo, suspensiones de S.aureus (106 UFC/mL) se incubaron durante 6 horas con las nanopartículas. Pudo apreciarse una disposición selectiva de las AuNPs alrededor de los cocos debida posiblemente a la interacción electrostática entre la superficie de las nanopartículas con carga positiva y la pared celular -constituida por peptidoglican- con carga negativa.