Evaluación de plataformas de oro modificadas para la construcción de un aptasensor electroquímico para la detección de trombina

YAMILE JALIT; FABIANA A. GUTIERREZ; GALINA DUBACHEVA; LILIANE COCHE-GUERENTE; ERIC DEFRANCQ; PIERRE LABBE; GUSTAVO A. RIVAS; MARCELA C. RODRIGUEZ

Córdoba

Congreso; XVII Congreso Argentino de Físico Química y Química Inorgánica; 2011

AAIFQ

En la última década la obtención de plataformas de reconocimiento molecular basadas en la inmovilización de aptámeros sobre transductores electroquímicos ha crecido notablemente. Este crecimiento se debe a las conocidas ventajas de los aptámeros y de los transductores electroquímicos. Los aptámeros son ácidos nucleicos sintéticos (ssADN o ARN) que poseen la capacidad de reconocer e interactuar específicamente con diversos analitos de interés, por ejemplo proteínas y fármacos. En este trabajo se presenta una novedosa alternativa para el desarrollo de un aptasensor para la detección de trombina. El aptámero anti-trombina es una secuencia de ssADN de 15 bases que reconoce específicamente trombina humana, enzima glucoproteica de fundamental importancia en el proceso de coagulación sanguínea. El biosensor fue obtenidos por modificación de electrodos de oro mediante adsorción de ácido 4-mercapto benzoico (4MBA), seguido de la inmovilización covalente de estreptavidina. En cada etapa se evaluaron las condiciones operativas para el óptimo desempeño del aptasensor por medio de voltamperometría cíclica y espectroscopía de impedancia faradaica. La inmovilización del aptámero por enlace covalente y la posterior formación del complejo de bioafinidad trombina-aptasensor se estudiaron a través de los cambios de la señal voltamperométrica de un indicador rédox (ferricianuro de potasio) y por cambios en la resistencia a la transferencia de carga (Rtc) de una sonda electroquímica (ferricianuro/ferrocianuro de potasio). En este sentido se observó que la Rtc aumenta con el tiempo de interacción del aptámero hasta alcanzar un valor constante, seleccionándose un tiempo óptimo de 60 min para la obtención de la capa de reconocimiento del aptasensor. En estas condiciones es posible la detección sensible de trombina en niveles de picomoles (5,3 x 10-12 moles). Un apropiado control de las condiciones de trabajo permitió optimizar la interacción aptasensor-proteína aún en presencia de interferentes. De este modo, la combinación de las interesantes propiedades de reconocimiento molecular del aptámero anti-trombina y las reconocidas ventajas de los transductores electroquímicos permitió obtener un aptasensor para trombina altamente sensible y selectivo, abriendo las puertas al desarrollo de nuevos protocolos para la biodetección electrónica de diversos analitos.