Producción de oxígeno singlete de productos naturales bioactivos de Heterophyllaea pustulata.

MAMONE LEANDRO; CASAS ADRIANA; MARIONI JULIANA; SUSANA NUÑEZ MONTOYA

San Miguel de Tucumán

Otro; III REUNIÓN DE FOTOBIÓLOGOS MOLECULARES.; 2016

Previamente, hemos demostrado que el extracto bencénico (Ben) de Heterophyllaea pustulata Hook f. (Rubiaceae), produce una reducción de 39,31 ± 3,50 % (% R) en el biofilm de Candida tropicalis cuando fue fotoestimulado.1 A partir del extracto Ben se aislaron dos antraquinonas, rubiadina (AQ1) y 1-metil éter de rubiadina (AQ2), con acción fotodinámica in vitro sobre el mismo biofilm, ya que produjeron 63,5 ± 4,4 %R y 47,0 ± 10,0 %R, respectivamente. Se observó que este efecto estuvo directamente relacionado a un incremento en los niveles de anión superóxido (O2?-) a las concentraciones bioactivas.2,3 Por lo tanto, el mecanismo de acción parecería involucrar un incremento en los niveles de especies reactivas del oxígeno (ERO): O2?- y/u oxígeno singlete (1O2). En este trabajo nos propusimos determinar si los productos bioactivos tienen capacidad para generar 1O2 cuando son fotoestimulados.A partir de las partes aéreas de H. pustulata, previamente desgrasadas con hexano, se obtuvo el extracto bencénico en aparato soxhlet. AQ1 y AQ2 se purificaron a partir del extracto Ben bioactivo (94-96% de pureza, según HPLC), las cuales se identificaron por sus datos espectrales. Se cuantificó la producción de 1O2 de los extractos y de las AQs, empleando la sonda fluorescente específica Singlet Oxygen Sensor Green (Invitrogen, USA) en buffer fosfato salino (PBS)4. Se trabajó a las concentraciones bioactivas de los extractos (200 µg/ml), y de las AQs (1,98 µg/ml para AQ1 y 15,6 µg/ml para AQ2). El ensayo se realizó en oscuridad e irradiación (15 min), utilizando una lámpara actínica con máximo de emisión a 420 nm. Como control positivo se usó azul de toluidina y perinaftenona. El producto fluorescente se cuantificó a 525 nm. Cuando el extracto Ben fue irradiado se incrementó en 2,55± 0,04 veces la producción de 1O2. Mientras que para AQ1 y AQ2 el incremento de esta ROS sólo fue 0,7 ± 0,4 y 0,9 ± 0,5 veces, respectivamente.Dado la baja generación de 1O2 producida por ambas AQs cuando son fotoestimuladas, podemos suponer que la producción de esta ROS en el extracto Ben se debería a la presencia de otras AQs fotosensibilizantes1. Estos resultados además permiten estimar, que en la actividad antibiofilm de este extracto también podría estar involucrado el mecanismo fotosensibilizante Tipo II (generación de 1O2). En cambio, para AQ1 y AQ2 la producción de 1O2 no sería una propiedad determinante en el efecto antibiofilm observado.