Presencia de células persistentes en biofilms de Candida tropicalis tratadas con Anfotericina B

JL BARONETTI; PL PÁEZ; J MARIONI; MG PARAJE; MA DA SILVA; M BOTTIGLIERI

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología - XIV Congreso Argentino de Microbiología; 2016

Laformación de biofilms es un importante factor de virulencia de Candida. Estoshongos tienen gran capacidad para formar biofilms sobre dispositivos médicos,resultando en infecciones altamente recalcitrantes a los tratamientosantifúngicos (ATFs). Esta resistencia intrínseca resulta de un complejofenómeno multifactorial la cual incluye la presencia de las recientementedescriptas células persistentes (CPs). Estas células se definen como variantesfenotípicas del tipo ?Wild Type? con capacidad de permanecer viables ante altasdosis de antimicrobianos. La presencia de las mismas en hongos como Candidaspp. es controversial ya que no se han identificados CPs en cultivosplanctónicos ni en biofilms de algunas especies de Candida. El objetivo delpresente estudio fue evaluar la presencia de CPs en biofilms de dos cepas de C.tropicalis tratados con Anfotericina B (AMB).Microorganismos:C. tropicalis de referencia (NCPF 3111) (1) y C. tropicalis de origen clínico(2) aislada de infección asociada a dispositivo médico.Determinación de Concentración Inhibitoria Mínima (CIM): Se realizó por elmétodo de microdilución para levaduras según protocolo del CLSI-Clinical andLaboratory Standards Institute (M27- A3)Formación de biofilm: Se realizó en microplaca de 96 pocillos y se cuantificómediante tinción con Cristal Violeta (CV) y lectura espectrofotométrica de laDensidad Óptica (DO). La unidad de biomasa de biofilm (UBB) se definiócomo  0.1DO595nm=1BBU. La formación de biofilms también se realizó sobrediscos de vidrio en microplaca de 24 pocillos para su estudio por MicroscopíaÓptica y Microscopía Confocal de Exploración Láser (MCEL).Formación y Cuantificación de CPs: Posterior a la formación del biofilm ytratamiento con ATF, se lavó y sonicó. Se realizó el recuento de Unidades Formadorasde Colonias (UFC/mL) y se graficó una curva de muerte. La presencia de CPs secorroboró realizando la CIM de las células resultantes.No selogró la erradicación del biofilms y la mayor inhibición del biofilm (80%) seobtuvo a 100 y a 200 µg/mL de AMB para la cepa 2 y la cepa 1, respectivamente.La presencia de CPs también se estudió en este rango de concentraciones de AMB,obteniéndose una población de 0.4 y 0.2% para las cepas 1 y 2 respectivamente.El estudio de microscopía óptica mostró predominio de células levaduriformes, yun concomitante aumento de muerte de los biofilms tratados. La MCEL permitióestudiar esta población y obtener imágenes de elevada resolución de latopografía de la muestra evidenciándose una disminución en la biomasa y grosora alteraciones en la rugosidad, del biofilm expuesto a AMB.La obtención ?in vitro? de una subpoblación de CPs en el biofilm con una curvade muerte dependiente de la dosis con patrón bifásico permitirá en un futurorealizar estudios del estrés celular de dicha población.