IMBIV   05474
INSTITUTO MULTIDISCIPLINARIO DE BIOLOGIA VEGETAL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Efecto de la frecuencia de irradiación de antraquinonas en la fotinactivación de Candida tropicalis biofilms
Autor/es:
MARIONI JULIANA; PARAJE MARÍA GABRIELA; COMINI LAURA R.; SUSANA NUÑEZ MONTOYA; CABRERA JOSÉ L.
Lugar:
San Miguel de Tucumán
Reunión:
Otro; III REUNIÓN DE FOTOBIÓLOGOS MOLECULARES.; 2016
Institución organizadora:
GRAFOB
Resumen:
La incidencia de infecciones fúngicas nosocomiales aumentó significativamente en la última década, siendo Candida tropicalis uno de los patógenos más frecuentemente aislado, presentando alta formación de biofilm1. En trabajos previos, demostramos que rubiadina (AQ1) y 1-metil éter de rubiadina (AQ2), dos antraquinonas (AQs) fotosensibilizantes aisladas de Heterophyllaea pustulata Hook f. (Rubiaceae), presentaron acción fotodinámica in vitro sobre biofilm de C. tropicalis. Este efecto estuvo directamente relacionado al aumento de estrés oxidativo y nitrosativo2,3. El objetivo de este trabajo fue aumentar la efecto antifúngico de estas AQs sobre biofilms de C. tropicalis, modificando la frecuencia de irradiación en función de su acumulación en el biofilm, y evaluando la generación de especies reactivas del oxígeno (ERO) y nitrógeno (ERN). La acumulación de las AQs en el biofilm se analizó por HPLC, exponiendo éste a 0,039 mM de AQ1 y 0,112 mM de AQ2 durante 0.5, 1, 3 y 6 h. En función de la acumulación de cada AQ, se modificó la frecuencia de irradiación del biofilm tratado con las mismas. El biofilm se expuso a tres concentraciones de cada AQ (SubCIM, CIM y SupraCIM) en oscuridad e irradiación, con lámpara actínica (máximo 420 nm) durante 15 min a tiempo (t) 0 y a diferentes tiempos (t= 0, 3, 6, 24, 27 y 30h). La cuantificación del biofilm se realizó por el método de O´Toole. El sobrenadante se separó para medir la producción de anión superóxido por la reacción de Nitro-Blue tetrazolio (NBT), y la generación de óxido nítrico por la técnica de Griess. La capacidad antioxidante total del sistema se estudió con el ensayo FRAP (Ferrous Reduction Antioxidant Potency) y la activación de la enzima superóxido dismutasa por el ensayo NBT.Demostramos que AQ2 presenta un máximo de acumulación a las 3h de incubación de 22,4 ± 4,4%, mientras que AQ1 tiene un bajo % de acumulación (1,22 ± 0,01 %) hasta las 6h de incubación. Cuando sólo se irradió a t= 0h, AQ1 produjo un 63.5 ± 4.5% de reducción (%R) a la SupraCIM y AQ2, 47 ± 10%R a la CIM. Cuando la irradiación se realizó a t= 0, 3, 6, 24, 27 y 30h, AQ1 alcanzó 52,7 ± 10,1 % R a la CIM y AQ2 logró un 62.9 ± 7.4 %R a la SubCIM. En esta condición se produjeron incrementos significativos en los niveles de ERO y ERN, con la consecuente activación de la SOD y de la capacidad antioxidante total del biofilm. En conclusión, el aumento de la frecuencia de irradiación permitió reducir la concentración activa de AQ2 al 50%, permitiendo el uso de concentraciones SubCIM; y además, potenció notablemente la fotoinactivación de biofilms de C. tropicalis. Por lo tanto, la capacidad de acumulación de las AQ en el biofilm aumentaría notablemente el efecto antifúngico, pudiendo tener un importante impacto clínico4.