IMBIV   05474
INSTITUTO MULTIDISCIPLINARIO DE BIOLOGIA VEGETAL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio de la estructura tridimensional y el estrés oxidativo del Biofilms de Candida albicans mediante Microscopía Confocal de Exploración Láser
Autor/es:
DA SILVA, MARIA ANGEL; PERALTA, MARIANA A.; ORTEGA, MARÍA GABRIELA; CABRERA JOSE L.; PARAJE, MARÍA GABRIELA
Lugar:
Córdoba
Reunión:
Jornada; XV Jornadas Argentinas de Microbiología; 2014
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
La creciente aparición de infecciones por Candida resistentes a los tratamientos de uso común se ha tratado de contrarrestar con dosis más altas de antifúngicos (ATFs) o con terapia combinada, con los riesgos de efectos adversos que esto implica. Por este motivo esta temática requiere la investigación y búsqueda incesante de nuevas drogas antifúngicas. Los flavonoides son compuestos naturales con diversas propiedades biológicas entre las que se destaca la actividad antimicrobiana. Estamos estudiando la actividad inhibitoria sobre el biofilms de Candida albicans de un flavonoide aislado de la raíz de Dalea elegans (8PP). OBJETIVO Analizar el efecto de dos flavonoides sobre la estructura y el estrés oxidativo de biofilms de Cadida albicans mediante Microscopía Confocal de Exploración Láser (MCEL) MATERIALES Y MÉTODOS Microrganismos: dos cepas de C. albicans de origen bucal: una sensible (CaS) y otra resistente (CaR) a fluconazol (cortesía del Dr. E. White, Washington University, Seattle, EE.UU). Esta última expresa transportadores de eflujo de tipo CDR1, CDR2 y MDR1. Compuestos: Flavonoides: 8PP y Robinetina. Fluconazol como antifúngico de referencia. MCEL: Los biofilms fueron formados sobre discos de vidrio de 12mm de diámetro en placas de 24wells y tratados con concentraciones sub-CIM (según CLSI) de 8PP, Robinetina y Fluconazol. Posteriormente, fueron teñidos con Calcofluor White (0,5%v/v) y con DCFH-DA (10µM) durante 15 minutos. Calcoflour White se une a las moléculas de quitina de la pared celular y la sonda DCFH-DA permite detectar especies reactivas de oxígeno (ROS) intracelularmente. Las muestras fueron excitadas a 355 nm para Calcoflour y a 488 nm para DCFH-DA utilizando un Fluoview FV1000 Espectral Olympus MCEL. Se realizaron cortes seriales del plano xy a intervalos de 0,5µm sobre el eje z y las imágenes resultantes fueron procesada con el software Olympus Fluoview FV 1000. RESULTADOS Se observó formación de biofilms de CaS y CaR de 12 µm y 17,5 µm de tamaño respectivamente. Con Fluconazol el tamaño disminuyó a 2,5 µm (80%) para CaS y a 7 µm (60%) para CaR. Para 8PP la reducción fue de 4,5 µm (38%) y de 7,5 µm (43%) para CaS y CaR respectivamente, mientras que con Robinetina los valores de reducción fueron de 8 µm (33% CaS; 54% CaR) para ambas cepas. La sonda DCFH?DA evidenció la presencia de ROS intracelular con los tres compuestos, principalmente en la base del biofilms. CONCLUSIÓN El biofilms no pudo ser erradicado completamente con Fluconazol debido a la resistencia intrínseca del mismo. Si bien los flavonoides presentaron actividad antifúngica contra el biofilms, ésta fue menor al de referencia. La utilización de la sonda correlacionó con estudios previos de estrés oxidativo (cuantificación con NBT) permitiendo además estudiar la localización en la estructura tridimensional. Se trabajara en combinaciones entre compuestos sintéticos y naturales en búsqueda de una sinergia que erradique el biofilms en infecciones asociadas a los mismos.