UN EFECTOR DEL OOMICETE HYALOPERONOSPORA ARABIDOPSIDIS QUE ALTERA EL DESARROLLO VEGETAL E INCREMENTA LA SUSCEPTIBILIDAD A PATÓGENOS INTERACTÚA CON BIM1, UN FACTOR DE TRANSCRIPCIÓN DE ARABIDOPSIS INVOLUCRADO EN LA VÍA DE SEÑALIZACIÓN DE BRASINOESTERO

BOGINO MARIA FLORENCIA; FABRO GEORGINA

VIRTUAL

Congreso; IV REUNIÓN CONJUNTA DE SOCIEDADES DE BIOLOGÍA DE LA REPÚBLICA ARGENTINA; 2020

Soc de Biología de Cuyo, Soc de Biología de Córdoba, Soc de Biología de Tucumán

El efector HaRxL106 de Hyaloperonospora arabidopsidis (Hpa), un oomicete biótrofo obligado que ataca a la planta modelo Arabidopsis thaliana, es una proteína con estructura modular. En su amino terminal contiene un dominio RxLR probablemente implicado en la translocación al citosol de la célula vegetal, y un dominio carboxilo terminal a través del cual interactúa con numerosas proteínas vegetales. Estudios preliminares utilizando dos híbridos en levadura (Y2H) indican que HaRxL106 interacciona con BIM1, un miembro de una pequeña familia de factores de transcripción de tipo bHLH. En presencia de hormonas brasinoesteroides (BRs), BIM1 hetero-dimeriza con BES1, uniéndose a promotores y activando la transcripción de numerosos genes de respuesta a BRs. En este trabajo confirmamos la interacción HaRxL106-BIM1 in planta, realizando ensayos de complementación bi molecular de la fluorescencia (BiFC) en plantas de Nicotiana benthamiana mediante la co-expresión de ambas proteínas ya sea fusionadas al dominio amino terminal de la proteína fluorescente amarilla (YFPn-HaRxL106) o al dominiocarboxilo terminal de la CFP (BIM1-CPFc). Adicionalmente, desarrollamos ensayos de Co-Inmuno-precipitación (Co-IP) en esta misma planta utilizando los constructos YFP-HaRxL106 y BIM1-FLAG. Cabe destacar que cuando HaRxL106 es expresado de modo constitutivo en plantas de Arabidopsis, las transgénicas fenocopian el síndrome de evasión de la sombra o SAS. Estas plantas son más susceptibles a patógenos biótrofos (el oomicete Hpa) y hemibiótrofos (la bacteria Pseudomonas syringae pv. tomato -Pst DC3000-). Nuestro interés radica en investigar si los fenotipos mencionados dependen de BIM1. Ensayos utilizando plantas mutantes en los 3 factores de transcripción de la familia de BIM1 (líneas bim123) desafiadas con Pst DC3000 o Hpa (raza Noco2) mostraron que estas plantas mutantes son menos susceptibles que el ecotipo salvaje (Col-0), ya que observamos menor crecimiento bacteriano y reducida esporulación de Hpa. Es interesante destacar que las plantas bim123 no exhiben rasgos de defensas activas constitutivamente, puesto que no acumulan callosa basalmente y no incrementan la deposición de este polímero en respuesta a la infección con Pst DC3000. Asimismo, muestran expresión reducida del marcador de defensa de la vía del ácido salicílico PR1, comparado con plantas controles. Nuestros resultados sugieren que BIM1 podría comportarse como un factor de susceptibilidad a Hpa, siendo modulado por el efector HaRxL106. Para investigar esta hipótesis continuaremos estudiando los fenotipos de susceptibilidad en plantas bim123 transformadas con HaRxL106 bajo el control de promotores constitutivos o inducibles. Asimismo, continuaremos con el estudio del fenotipo SAS.