CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

La hemofilia B es una enfermedad hereditaria, caracterizada por hemorragias debidas a la deficiencia del FIX.Afecta a 1 de cada 30000 varones según la Federación Mundial de la Hemofilia [Stonebraker et al, 2011]. En la mayoría de los casos los pacientes presentan una reducción cuantitativa de dicha proteína y la gravedad de las manifestaciones clínicas se correlaciona con la magnitud de la deficiencia del FIX [Schaub, 2011]. La molécula de FIX desempeña un rol esencial en la cascada de coagulación, posee un peso molecular teórico de 46,54 kDa con un importante número de modificaciones post-traduccionales. Este trabajo tiene por objetivo expresar el FIXr en cultivos celulares en adhesión y posteriormente en cultivos en suspensión en alta densidad celular y en ausencia de proteínas de origen animal y/o vegetal.Se generaron clones estables que expresan el FIXr en una línea celular deficiente de la enzima Deshidrofolato Reductasa (DHFR), se incrementaron los niveles de expresión del FIXr utilizando el sistema DHFR/MTX por agregado de concentraciones crecientes de Metotrexato (MTX), los clones que presentaron mayores niveles de expresión de proteína activa fueron adaptados al crecimiento en suspensión. A fin de caracterizar un clon adaptado al crecimiento en suspensión, se evaluó la presencia del gen mediante PCR, de ARN mensajero mediante una transcripción reversa y posterior PCR, y proteína por ensayos de Western Blot y Cromatografía Líquida de AltaResolución (HPLC). El FIX es una glicoproteína compleja con relevancia en la salud. A pesar de que la estrategia utilizada en este trabajo puede ser mejorada se demostró la factibilidad de expresar proteína en una línea celular de mamíferosconservando su actividad biológica.