EL ESTADO DE GLÓBULO FUNDIDO DE L-BABP ES PROPENSO A AGREGACIÓN

SALINAS, SR; MONTICH, GG

Congreso; XLIV Reunión Anual SAB; 2015

p { margin-bottom: 0.21cm; direction: ltr; color: rgb(0, 0, 0); }p.western { font-family: "Times New Roman",serif; font-size: 12pt; }p.cjk { font-family: "Droid Sans Fallback","MS Mincho"; font-size: 12pt; }p.ctl { font-family: "Lohit Hindi","MS Mincho"; font-size: 12pt; }Laproteína de unión a ácidos biliares proveniente de hígado depollo (L-BABP) pertenece a la familia de proteínas de unión aácidos grasos y otros ligandos apolares. Los miembros de estafamilia son de bajo peso molecular (~15 kDa) y poseen una estructuratridimensional típica de barril‑β, compuesto de 10 hebras-βantiparalelas formando dos hojas‑β ortogonales [1]. Lacavidad formada da lugar al sitio de unión de ligandos. Se hademostrado que L-BABP presenta una dinámica conformacionalimportante frente a la unión a membranas lipídicas y a cambios enel pH [2, 3]. En particular, se describió un estado de glóbulofundido, con características similares a la proteína nativa, apH=2.5, 0.1M NaCl y a pH=1.5, 0.01 M NaCl.Eneste trabajo estudiamos la dinámica rotacional del residuotriptófano de L-BABP utilizando anisotropía de emisiónfluorescencia resuelta en el tiempo. El estado nativo de L-BABP poseeun tiempo de correlación rotacional (ɸ) de ~4.5 ns, mientras que elestado caracterizado como desplegado (pH=2, 0.01M NaCl) muestra un ɸde ~2 ns, consistente con un aumento en la movilidad segmental. Losestados glóbulos fundidos muestran valores intermedios de ɸconsistentes con recuperación parcial de la compactación. Particularmente, el estado glóbulo fundido a pH 2.5 en presencia desal posee un ɸ inicial cercano a 3.5 ns. Sin embargo, las medicionesluego de tiempos largos, en el orden de horas, muestran que la mismamuestra alcanza progresivamente valores >20 ns, consistente conestados agregados de la proteína. Las muestras con altos valores deɸ fueron analizadas mediante cromatografía de exclusión molecular,eluyendo principalmente en el volumen muerto de una columna con unrango de separación de 3x103?7x104Da, corroborando la agregación de la proteína. Mediante técnicasespectroscópicas y bioquímicas estudiamos si las característicasiniciales del estado glóbulo fundido se mantienen en el agregado obien existen poblaciones conformacionales diferentes relacionadas ala cinética de agregación de esta proteína.