ESTUDIO SOBRE LA ACETILACIÓN DE TUBULINA Y LA EXPRESIÓN DE DOUBLECORTIN Y alpha-Lis-1 EN CÉLULAS CAD

CHESTA M.E.; BISIG C.G.; ZAMPAR G.G.; D¨ªAZ N.; CHANADAY N.; ARCE C.A.

Los Cocos, C¨®rdoba, Argentina

Congreso; SAN; 2007

Estudio sobre la acetilaci¨®n de tubulina y la expresi¨®n de doublecortin y ¦Á-Lis-1  y   en c¨¦lulas CAD. Chesta, M.E., Bisig, C.G, Zampar, G.G., D¨ªaz, N. M., Chanaday, N. L., y Arce, C.A. CIQUIBIC (Conicet), Departamento de Qu¨ªmica Biol¨®gica, Facultad de Ciencias Qu¨ªmicas (U.N.Cba). Ciudad Universitaria. 5000-C¨®rdoba.   Las c¨¦lulas CAD son derivadas de un tumor de cerebro de rata y proliferan en medio de cultivo con suero fetal y se diferencian hacia un fenotipo neuronal cuando se elimina el suero, sin necesidad del agregado de factores tr¨®ficos. Hab¨ªamos encontrado que estas c¨¦lulas carecen de varias prote¨ªnas asociadas a microt¨²bulos (MAPs). Teniendo en cuenta que se les asigna vitales funciones a estas prote¨ªnas y que las CAD emiten proceso aparentemente normales, consideramos importante investigar este aspecto. En primer lugar analizamos otras prote¨ªnas MAPs las cuales, por ser de reciente descubrimiento o por estar en menor cantidad, no est¨¢n tan estudiadas. As¨ª, mediante western blots e inmunofluorescencia encontramos que doublecortin tampoco est¨¢ presente en CAD, mientras que ¦Á-Lis-1 si est¨¢. Como controles positivos, se usaron muestras de cerebro de rat¨®n (en los western blots) y c¨¦lulas de cerebro de embri¨®n de pollo o neuronas de hipocampo de embriones de ratas.    Otra particularidad de CAD es que poseen muy poco (o carecen) de tubulina del isotipo acetilado. Dado que microt¨²bulos acetilados han sido involucrados en la estabilidad de microt¨²bulos, estudiamos en estas c¨¦lulas el dinamismo de los microt¨²bulos en CAD tratadas y no tratadas (controles) con Trichostatin A (TSA) que es un inhibidor de la tubulina deacetilasa. Se encontr¨® que las c¨¦lulas tratadas con TSA, tienen microt¨²bulos con un tiempo de vida media mayor (p < 0.05) que las c¨¦lulas control. El tiempo de vida media se midi¨® haciendo una curva de tiempo de tratamiento de las c¨¦lulas con nocodazol y posterior determinaci¨®n de la cantidad de microt¨²bulos remanentes. El control de la efectividad de TSA para incrementar tubulina acetilada se realiz¨® por western blot e immunofluorescencia.