Construcción de nanofilms de Insulina, estudio de sus propiedades reológicas y su utilización como soportes de cultivo para neuronas de hipocampo.

GRASSO EJ; OLIVEIRA RG; MAGGIO B

Córdoba

Encuentro; Tercera Reunión NanoCórdoba 2014; 2014

El comportamiento de nanofilms de insulina en la interface agua-aire es críticamente afectado por la presencia de Zn2+ en la subfase. Dicho catión induce la condensación de los nanofilms en las isotermas de compresión, lo cual fue muy evidente por microscopía de ángulo de Brewster. Más aún, el Zn2+ induce marcadas variaciones en el potencial de superficie y una considerable histéresis en la organización molecular de los mismos. Las propiedades reológicas de los films se estudiaron mediante ciclos oscilatorios de compresión-expansión donde se observó una respuesta dilatacional (mayor en los nanofilms más Zn2+) y una módulo de ?shear? sólo en los nanofilms con Zn2+ en la subfase. El desarrollo de módulos de ?shear? sugieren la formación de redes viscoelásticas en la superficie de los nanofilms. Por otro lado, los nanofilms de insulina en presencia y ausencia de Zn2+ fueron transferidos a soportes sólidos para el cultivo primario de neuronas de hipocampo de rata; donde se conoce que la insulina soluble induce la activación del receptor IGF-1 (factor de crecimiento tipo insulina-1) y la consecuente polarización neuronal. Sin embargo, no se conoce si la insulina organizada como un nanofilm puede inducir dicha polarización. Para ello transferimos los nanofilms a soportes sólidos a baja (14 mN/m) y alta (44 mN/m) presión de superficie y se cultivaron sobre éstos neuronas en etapas tempranas de diferenciación por 24 hs. La polarización neuronal se estudió microscopía confocal. Los sitios de adherencia y morfología de los conos de crecimiento se estudiaron por microscopía de contraste por interferencia de reflexión. Se observó que los nanofilms de insulina comprimidos a 14 mN/m inducían la polarización neuronal de manera similar a una solución concentrada de insulina. Por el contrario, dicho fenómeno no se observó en los cultivos sobre los nanofilms comprimidos a 44 mN/m. En conclusión, nuestro resultados sugieren que las neuronas pueden diferenciarse en substratos donde se observan una baja elasticidad dilatacional o de ?shear? y una mayor fluidez provista por una red viscoelástica más expandida.