A novel method to prepare highly enriched primary cultures of chicken retinal horizontal cells

MORERA L.P.; DIÁZ N M; GUIDO M E.

Córdoba

Jornada; Asociación de Investigación en Visión y Oftalmología; 2013

AIVO

Objetivos: En el presente trabajo nos propusimos purificar y realizar cultivos primarios de células horizontales (HCs) de la retina de pollo para su posterior caracterización. Métodos: Se realizaron disgregados de retina a partir de 10 ojos de embriones de pollos de 14 días. Se sometieron a un gradiente de albumina de suero bovino (BSA) del 1% al 5% durante 15 min a 300 rpm. Se mantuvieron cultivos primarios de cada fase del gradiente durante 4 días y se estudiaron las diferentes poblaciones celulares por inmunocitoquímica (ICQ). Resultados: A través de un gradiente con BSA se logró purificar y posteriormente obtener cultivos enriquecidos en HCs. Se examinaron las distintas fases del gradiente por ICQ con un anticuerpo específico que reconoce PROX-1, un marcador especifico de todas las HCs. Resultados preliminares evidencian que solo la fracción correspondiente al 2,5% de BSA se encuentra altamente enriquecida en células PROX-1 positivas. Discusión: De varias técnicas ensayadas, el gradiente de BSA probó ser el método más efectivo para separar distintas poblaciones celulares de la retina de pollo. También se delimitaron las condiciones óptimas de cultivo. Esto nos permitirá a futuro caracterizar esta población de neuronas de la retina mediante estudios bioquímicos y farmacológicos.