ESTABLECIMIENTO DE UNA TÉCNICA DE CULTIVO DE FIBROBLASTPS PULPARES DE RATA

CAMBIASSO, M.J.; SOTO, S.N.

San Nicolas, Buenos Aires

Congreso; L REUNIÓN ANUAL SAIO; 2017

OBJETIVO: El objetivo de este trabajo fue desarrollar y poner a punto una técnica de cultivo celular que permita obtener un cultivo enriquecido en fibroblastos pulpares de rata con la finalidad de estudiar su respuesta frente a la estimulación con lipopolisacárido y estradiol. MÉTODOS: Se extrajeron los incisivos inferiores de ratas hembra Wistar adulta y con hoja de bisturí se procedió al corte longitudinal de los dientes en solución 1% HANK. Con una cucharilla estéril se extrajo el tejido pulpar que fue sometido a disociación química en solución 10% tripsina y disociación mecánica con pipetas de Pasteur de diferentes diámetros. Los trozos de tejido fueron sembrados en cápsulas de Petri de 60 mm en medio F10 (DMEM suplementado con 10% de suero fetal bovino) y se mantuvieron a 37° en estufa de cultivo con 5% de presión de CO2. Después de 14 días In vitro los cultivos formaron una monocapa de células mixtas, a partir de las cuales se realizaron sucesivos pasajes hasta lograr el enriquecimiento de fibroblastos pulpares. RESULTADOS: En base a criterios morfológicos e inmunocitoquímicos se determinó que a partir del cuarto pasaje el 99% de las células presentes en el cultivo son fibroblastos. Los mismos presentan morfología fusiforme e inmunomarcación específica contra vimentina, filamento intermedio del citoesqueleto de fibroblastos. CONCLUSIÓN: Se logró desarrollar y poner a punto una técnica de cultivo celular que permitió obtener cultivos enriquecidos en fibroblastos pulpares de rata, estos constituyen un modelo de estudio factible y versátil a partir del cual se pueden estudiar diferentes mecanismos de respuesta celular In vitro a diversos estímulos. Aprobación del Comité Institucional para el cuidado y uso de animales de laboratorio Instituto de Investigación ?Mercedes y Martín Ferreyra? INIMEC-CONICET-UNC: CAM-0002 (2016). Financiamiento: Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica (PICT 2015 N° 1333) Secretaria de Ciencia y Tecnología UNC (2016-2017) Conflictos de Intereses: No Declaració evaluación comisión etica: Si Numero de Resolución: CAM-0002 (2016)