DESÓRDENES CONGÉNITOS DE LA GLICOSILACIÓN: POSIBLE ROL DE LOS INTERCAMBIADORES NA+/CA2+ (NCX1 AND NCKX1) DE PLAQUETAS HUMANAS EN LOS EVENTOS TROMBO-HEMORRÁGICOS ASOCIADOS A CDG.

BISTUÉ MILLÓN MB; SYRAVEGNA M; SPÉCOLA N; CHACÓN S; DODELSON DE KREMER R; ELSO DE BERBERIÁN, G.; ASTEGGIANO, C

Medellin

Congreso; Reunión de Sociedad de Errore Innatos del Metabolismo y Pesquiza Neonatal (SLEIMPN); 2013

Sociedad de Errore Innatos del Metabolismo y Pesquiza Neonatal (SLEIMPN)

Sociedad de Errore Innatos del Metabolismo y Pesquiza Neonatal (SLEIMPN) Medellín, Colombia, del 1 al 4 de diciembre 2013- Abstract presentado oral   CONGENITAL DISORDER OF GLYCOSYLATION: A PUTATIVE ROLE OF  HUMAN PLATELETS NCX1 AND NCKX1 CA+2 EXCHANGERS IN THROMBUS-HEMORRHAGIC EVENTS ASSOCIATED WITH CDG. Bistué Millón MB(1); Syravegna M(2); Spécola N(3); Chacón S(4); Dodelson de Kremer R(1); Elso de Berberian G(2,6); Asteggiano CG(1,5,6)*. (1)Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas (CEMECO), Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Nacional de Córdoba, Córdoba, Argentina. (2) Laboratorio Biofísica, Instituto Mercedes y Martín Ferreyra (IMMF-CONICET), Córdoba, Argentina. (3)Unidad Metabolismo,  Hospital de Niños de La Plata, Buenos Aires, Argentina.   (4) Servicio Neurología Infantil, Hospital Centenario de Gualeguaychu, Entre Ríos, Argentina. (5) Facultad de Medicina, Universidad Católica de Córdoba, Córdoba, Argentina. (6) Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET), Argentina  E-mail: asteggianocarla@hotmail.com /web page: www.cdgargentina.com.ar   Congenital Disorders of Glycosylation (CDG) are genetic diseases due to defects in glycoproteins or glycolipids synthesis. The phenotype is multisystemic and thrombus-hemorrhagic events are frequently observed in these patients. In platelets, Ca+2 signaling is necessary to prevent inappropriate thrombus formation. The Na+/Ca2+ (NCX) and Na+/K+-Ca2+ (NCKX) exchangers play a crucial role in controlling cytosolic [Ca2+].  The aim of this report is to contribute to the biochemistry characterization of these exchangers in human platelets, with special emphasis in glycosylation status and functionality.  Our results demonstrate (i) the expression of NCX and NCKX proteins in human platelets, (ii) NCX1 and NCKX1 45Ca2+-uptake, (iii) heavily N- and O-glycosylated proteins by lectin-affinity chromatography and by Western blot. Proteins were detected after the immunoprecipitation and, with different lectins, after enzymatic deglycosilation. (iv) Lower levels of NCKX1 (n=3; P<0.05) and reduced expression of NCX1 in a PMM2-CDG patient (n=3; P< 0.0001) and (v) a significantly decreased Na+-dependent 45Ca+2 uptake in a PMM2-CDG patient with abnormal platelet aggregation (t-test p< 0.05). Discussion: We demonstrated that both exchangers are glycosylated and that the expression and activity of NCX1 are more dramatically reduced than NCKX1, suggesting a possible role for the abnormal platelet aggregation in CDG patients. CONICET-GI11220090100063/FONCyT/PICT2010-2824. E-Mail: asteggianocarla@hotmail.com /web page: www.cdgargentina.com.ar     DESÓRDENES CONGÉNITOS DE LA GLICOSILACIÓN: POSIBLE ROL DE LOS INTERCAMBIADORES NA+/CA2+ (NCX1 AND NCKX1) DE PLAQUETAS HUMANAS EN LOS EVENTOS TROMBO-HEMORRÁGICOS ASOCIADOS A CDG. Los Desórdenes Congénitos de la Glicosilación (CDG) son enfermedades genéticas debido a defectos en la formación de los glicanos unidos a proteínas o lípidos. El fenotipo clínico multisistémico con eventos trombo-hemorrágicos se observan con frecuencia en estos pacientes. En plaquetas humanas, la señalización de [Ca2] citosólico es necesaria en la agregación para prevenir la formación de trombos o sangrado y los intercambiadores  Na+/Ca2+ (NCX) and Na+/K+-Ca2+ (NCKX) juegan un papel fundamental en su control citosólico. Objetivo : Contribuir a la caracterización bioquímica de los intercambiadores de plaquetas humanas, con especial énfasis en el estado de glicosilación y su funcionalidad.   Nuestros resultados demuestran en plaquetas humanas (i) expresión de las proteínas NCX y NCKX, (ii) actividad de intercambio 45Ca2+ en NCX1 y NCKX1 ; (iii) N- y O-glicosilación en ambas proteínas, observado por cromatografía de afinidad de lectina e inmunoprecipitación y deglycosilation enzimática seguido de Western blot con diferentes lectinas ; (iv) una significativa disminución de la captación de 45Ca2+ Na+-dependiente en P1 (PMM2-CDG) con agregación plaquetaria anormal (P1)(t-test, p <0,05) y (v) en P2 (PMM2-CDG) se observó bajo nivel de intercambio de 45Ca2+ en NCKX1 (n=3, p<0,05) y reducida expresión de NCX1 (n=3, p<0,0001). Discusión: Si bien ambos intercambiadores estarían glicosilados, la expresión y la actividad de NCX1 se observaron dramáticamente reducidas respecto a NCKX1 en paciente CDG, lo que sugiere importancia y diferentes mecanismos de acción de la hipoglicosilación en la función de intercambio y en los procesos de agregación plaquetaria anormal en CDG. CONICET-GI11220090100063/FONCyT/PICT2010-2824.