Nuevas aplicaciones de la t¨¦cnica amino-cupro-arg¨¦ntica (A-Cu-Ag) y su comparaci¨®n con fluoro-jade B (FJ-B) en la eficacia para detectar neurodegeneraci¨®n inducida por MK801, etanol y ¨¢cido quinol¨ªnico.

BENDER C; DE OLMOS S; MANZINI, F; DE OLMOS, J.S.

Villa Giardino, C¨®rdoba, Abril 2006

Taller; VIII Taller Argentino de Neurociencias; 2006

Taller de Neurociencias

Dentro de las herramientas disponibles para el an¨¢lisis neurotoxicol¨®gico en animales intactos, las t¨¦cnicas de impregnaci¨®n arg¨¦ntica se destacan por su sensibilidad y especificidad en la detecci¨®n de procesos neurodegenerativos.  Recientemente se ha introducido un marcador fluorescente, llamado Fluoro-Jade, que tambi¨¦n ha demostrado ser mas sensible y espec¨ªfico que las t¨¦cnicas tradicionales de histopatolog¨ªa (H&E, Nissl, etc).             El objetivo de este trabajo fue comparar la t¨¦cnica FJ- B (Schmued & hopkins, 2000) con la t¨¦cnica A-Cu-Ag (de Olmos et al., 1994); el protocolo arg¨¦ntico m¨¢s reciente.  Para ello se utilizaron ratas adultas de la cepa Wistar tratadas con tres drogas que provocan degeneraci¨®n neuronal: MK801, etanol y ¨¢cido quinol¨ªnico. Los animales tratados con MK801 recibieron una dosis de 5 o 10 mg/kg, i.p. y tuvieron una sobrevida de 72 h. Las ratas tratadas con alcohol recibieron 6 administraciones i.g. cada 8 horas. Cada una de las dosis variaron entre 5 y 0  g/kg  en funci¨®n del estado de intoxicaci¨®n de los animales, el cual fue estimado mediante ¨ªndices comportamentales. La sobrevida fue de 3 horas luego de la ¨²ltima administraci¨®n. Finalmente, el ¨¢cido quinol¨ªnico fue microinyectado en el estriado en un volumen de 0.4 ¦Ìl (400 ng/¦Ìl) y se estudiaron sobrevidas de 6, 12, 24 y 48 h..             Todos los animales fueron prefundidos transcardiacamente con soluci¨®n lavadora (Glucosa 0,4 %, Sucrosa 0.8 %, NaCl, 0,8%) y soluci¨®n fijadora (Paraformaldeh¨ªdo 4 %; ¨¢cido b¨®rico 1%; di-sodio tetra-borato 0,38%; sulfito de sodio 0,004%). Los cerebros fueron cortados con micr¨®tomo a 40 ¦Ìm de espesor y las secciones almacenadas seriadamente en la soluci¨®n fijadora, para los cortes designados a la t¨¦cnica A-Cu-Ag, o en KPBS 0,01M, para los cortes destinados al m¨¦todo FJ-B.             Por otro lado tambi¨¦n se realizaron experimentos cuya meta fue determinar si la t¨¦cnica A-Cu-Ag pod¨ªa combinarse con t¨¦cnicas inmunohistoqu¨ªmicas. Esto fue evaluado con anticuerpos contra el amiloide beta y contra fluoro-gold.              Los resultados de estos trabajos sugieren que la t¨¦cnica A-Cu-Ag es mas sensible en la detecci¨®n de neurodegeneracion que el FJ-B. Especialmente cuando se trata de procesos degenerativos en las terminales nerviosas y/o cuando la injuria no es masiva. Adem¨¢s pudimos demostrar la viabilidad de combinar en un mismo corte, t¨¦cnicas inmunohistoquim¨ªcas con la t¨¦cnica A-Cu-Ag. Este hallazgo abre nuevas alternativas en la investigaci¨®n de procesos neurodegenerativos.